论文部分内容阅读
研究目的:近年来人们过量饮酒已经成为全世界范围内极受关注的社会公共问题,饮酒过度会对机体健康产生严重的危害。中医学认为过量饮酒,可致使湿热有毒之邪困遏脾胃,或损伤肝胆,致肝失疏泄。金昭胶囊是无限极公司已上市的一款产品,它的成分主要为葛根、枳椇子、栀子,具有保护肝损伤作用,可以治疗和预防肝脏疾病。本实验主要挖掘其产品优势,探究其对酒精性肝胃损伤的保护机制,提升科技含量。首先通过研究金昭胶囊对急性酒精性肝、胃损伤模型小鼠醉酒状态、肝功、肝脂质及乙醇代谢酶、肝胃抗氧化酶活性等指标的影响,对金昭胶囊对急性酒精性肝、胃损伤的作用机制进行初步探讨,为其临床应用提供实验依据。其次,研究金昭胶囊对慢性酒精性肝损伤模型小鼠肝功、肝脂质及乙醇代谢酶、抗氧化酶、炎性因子、Keap1-Nrf2-NF-κB通路等指标的影响,从而对金昭胶囊对慢性酒精性肝损伤的保护作用及机制进行探究。研究方法:实验一:金昭胶囊对急性酒精性肝损伤小鼠的保护机制SPF级雄性ICR小鼠,周龄8～10周,体重为25～35g,适应性喂养后,按照随机体重区组法随机分为空白组（Control）,模型组（Model）、阳性药茵栀黄（YZH）组,金昭胶囊低剂量组（GZZ-L）,金昭胶囊中剂量组（GZZ-M）、金昭胶囊高剂量组（GZZ-H）共6组,每组10只。金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠每日灌胃金昭胶囊混悬液0.21g/kg、0.42g/kg和0.84g/kg,灌胃体积为20ml/kg,阳性药组灌胃茵栀黄颗粒混悬液1.5g/kg,20ml/kg;空白组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,灌胃1次/d,并观察动物一般状况,称重1次/周,并按动物体重调整灌胃量。持续给药4周后,各组小鼠禁食不禁水12h,除空白组外,其余各组灌胃50%的乙醇溶液12mL/kg,空白组灌予等体积的蒸馏水,建立小鼠急性酒精性肝损伤模型。摘眼球取血后取肝脏。观察指标:灌酒后小鼠行为状态、精神状态、二便状态、醉酒数、醉酒率。血清指标:谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。肝脏指标:丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）、肝脏病理切片。实验二:金昭胶囊对急性酒精性胃损伤小鼠的保护机制实验方法同实验一,摘眼球取血后取胃。胃指标:丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、前列腺素E2（PEG2）水平。实验三:金昭胶囊对慢性酒精性肝损伤小鼠的保护作用SPF级雄性ICR小鼠,周龄8～10周,体重为25～35g,按体重随机区组法分为空白组（Control）,模型组（Model）、阳性药护肝片（HGP）组,金昭胶囊低剂量组（GZZ-L）,金昭胶囊中剂量组（GZZ-M）、金昭胶囊高剂量组（GZZ-H）共6组,每组10只。除空白组每日灌胃生理盐水外,其余各组小鼠每日灌胃50%乙醇10ml/kg,阳性药组每日灌胃护肝片混悬液0.7g/kg,灌胃体积为20ml/kg,金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠每日灌胃金昭胶囊0.21、0.42、0.84g/kg,20ml/kg,金昭胶囊、酒精每日灌胃1次,连续灌胃4周。摘眼球取血后取肝脏。观察指标:小鼠行为状态、精神状态、二便状态。血清指标:谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。肝脏指标:总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）、肝脏病理切片。实验四:金昭胶囊保护慢性酒精性肝损伤小鼠的作用机制实验方法同实验三,摘眼球取血后取肝脏。肝脏指标:丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）水平;Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（keap1）、核因子E2相关因子（Nrf2）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）mRNA表达水平;Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（keap1）、核因子E2相关因子（Nrf2）、核转录因子-κBp65（NF-κBp65）、血红素加氧酶1（HO-1）、磷酸化核因子κB抑制蛋白α（pIκ-Bα）蛋白表达水平。研究结果:1实验一:与模型组相比,金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠的醉酒状态明显改善,醉酒数和醉酒率显著降低,血清ALT、AST水平显著降低（P<0.01,P<0.05）。低剂量组小鼠肝组织MDA、TC、TG水平显著降低（P<0.01）,ADH水平显著升高（P<0.01）,中剂量组小鼠肝组织MDA、TC、TG水平显著降低（P＜0.01）,ALDH、GSH、ADH水平显著升高（P<0.01）,高剂量组小鼠肝组织MDA、TC、TG水平显著降低（P<0.01）,GSH、ADH、CAT、SOD、ALDH水平显著升高（P<0.01）。病理切片金昭胶囊各组均有所改善。2实验二:与模型组相比,金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠胃组织MDA水平显著降低（P<0.01）。低剂量组小鼠胃组织SOD水平显著升高（P<0.01）,中剂量组小鼠胃组织NO、SOD水平显著升高（P<0.01）,高剂量组小鼠胃组织PGE2、SOD、NO水平显著升高（P<0.01,P<0.05）。3实验三:与模型组相比,金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠的醉酒状态明显改善,金昭胶囊低、高剂量组小鼠血清ALT、AST水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,中剂量组小鼠血清AST水平显著降低（P<0.01）。金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠肝组织TC、TG水平显著降低（P<0.01）,低剂量组小鼠肝组织ADH、ALDH水平显著升高（P<0.01）,中剂量组小鼠肝组织ADH、ALDH水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,高剂量组小鼠肝组织ADH、ALDH水平显著升高（P<0.01）。病理切片金昭胶囊各组均有所改善。4实验四:与模型组相比,金昭胶囊低、高剂量组小鼠肝组织MDA、TNF-α,IL-6水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,中剂量组小鼠肝组织MDA、IL-6水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,低剂量组小鼠肝组织CAT、GSH水平显著升高P＜0.01),中剂量组小鼠肝组织CAT、GSH水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,高剂量组小鼠肝组织CAT、SOD、GSH、IL-10水平显著升高（P<0.01）。与模型组相比,金昭胶囊低、高剂量组小鼠肝组织keap1、NF-κB mRNA表达水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,中剂量组小鼠肝组织NF-κB mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,低、中、高剂量组小鼠肝组织Nrf2 mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组相比,金昭胶囊低、中、高剂量组小鼠肝组织keap1、NF-κB p65、pIκ-Bα蛋白表达水平降低,Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高。研究结论:1金昭胶囊具有解酒护肝,保护急性酒精性肝损伤的功效,其作用机制与增强体内肝组织中乙醇代谢关键酶及抗氧化酶活性,减少脂质过氧化物的产生,保护肝细胞膜完整性,减少转氨酶的释放相关。2金昭胶囊具有保护急性酒精性胃损伤的功效,其作用机制与增强胃抗氧化酶活性,保护胃黏膜损伤相关。3金昭胶囊具有保护慢性酒精性肝损伤的功效,能增强体内肝组织中乙醇代谢关键酶活性,减少脂质过氧化物的产生,减少转氨酶的释放。4金昭胶囊保护慢性酒精性肝损伤的作用机制与增强体内肝组织中抗氧化酶活性,保护肝细胞膜完整性,调节炎性因子水平,调节keap1/Nrf2/NF-κB通路各指标mRNA、蛋白表达水平相关。