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脾虚证是临床上常见的一类中医证候,是慢性消化系统疾病的主要证型,与肠道菌群的变化有密切关系。本研究首次将16S rDNA-RFLP方法用于脾虚治疗中药的研究,建立了客观、准确的分子评价与筛选方法。首先选择大鼠为实验动物,采用大黄利泄塑造脾(阳)虚模型,用四君子汤、理中汤、补中益气汤和益胃汤对模型大鼠进行给药治疗,跟踪收集新鲜粪便;其次优化并建立了简便、快速、有效的大鼠粪便肠道菌群总DNA的提取方法;再次建立了大鼠肠道菌群16S rDNA PAGE分析方法,筛选并确定了适合研究大鼠肠道菌群变化的限制性内切酶(HaeⅢ、HinfⅠ),建立了16S rDNA-RFLP分析方法。采用建立的16S rDNA-RFLP分析方法对健康、模型及给药治疗后大鼠肠道菌群进行分析,建立并比较分析了了健康和脾虚模型大鼠肠道菌群的16S rDNA -RFLP(HaeⅢ和HinfⅠ)图谱;确定了脾虚模型大鼠的16S rDNA-RFLP(HaeⅢ和HinfⅠ)指纹特征;结合给药治疗后的模型大鼠肠道菌群的变化,建立了脾虚中药的肠道菌群16S rDNA-RFLP(HaeⅢ和HinfⅠ)筛选和评价指标体系。采用建立的肠道菌群分子药效评价体系对四实验方剂的治疗作用进行了评价,结果表明四个实验方剂对脾虚模型大鼠均有作用,并且肠道菌群明显恢复,且呈量效关系。本研究建立了脾虚治疗中药16S rDNA-RFLP筛选方法,该方法能简便、快速、有效的筛选脾虚治疗中药并对其药效进行评价,对中药作用机制的研究、脾虚证的本质研究及中医药现代化都具有重要的意义。