巨桉为重要用材树种,生长迅速,为我国林业产业发展做出重要贡献。但其对低温敏感,不耐干旱、盐渍,且不良环境常对桉树生产造成重大损失。因此,研究其非生物逆境胁迫响应的分子机制,挖掘桉树抗逆分子调控中发挥重要作用的基因,对桉树抗逆分子辅助育种意义重大。EgrZFP7是参与低温和高盐等逆境因子响应的一个C2H2型锌指结构蛋白转录因子。以拟南芥C2H2型锌指蛋白分类为依据,通过聚类分析结果表明EgrZFP7为C1-2iA类锌指蛋白。其编码蛋白除含有两个高度保守,核心序列为QALGGH的锌指结构域外,还含有1个与蛋白互作相关,富含亮氨酸(Leu)的L-box结构域,1个与转录活性相关的乙烯响应元件结合因子相关双性抑制子EAR基序(ERF-associated amphiphilic repression domain),也称为DLN-box。基因启动子序列上还含有ABRE、DREB和NACF等多个与逆境胁迫相关的顺式作用元件。4℃不同处理时间(0,2,6,12,24,48h)下筛选得到832个与EgrZFP7共表达基因(cor绝对值>0.9)。KEGG结果表明,有117个基因可与KEGG途径匹配,其中有71个基因参与基础代谢和次生代谢途径,22个基因参与氨基酸代谢途径,19个基因参与糖代谢。对EgrZFP7正向共表达相关系数最高的20个基因进行分析,发现其中有多个涉及逆境胁迫响应相关的转录因子如MYB、WRKY和ZFP转录因子家族成员等,同时有4个糖基转移酶基因。说明这些基因在巨桉低温逆境响应中,可能与EgrZFP7存在协同作用或调控关系。EgrZFP7超表达拟南芥转化植株中,侧根数目和长度有明显的增加和伸长,但超表达转基因株系低温下敏感程度提高,PEG处理下表现为不定根的伸长受到诱导,而高盐处理下并没有表现出敏感程度的变化。为进一步研究EgrZFP7的功能,构建了PMAL-C2X-Egr ZFP7原核表达载体,进行表达条件筛选与优化。结果表明,该蛋白可在Transetta(DE3)菌株中经0.4mmol?L-1IPTG诱导,在20℃环境中培养14h后在上清中大量表达。对原核表达的EgrZFP7蛋白纯化后,利用CASTing手段筛选EgrZFP7蛋白结合的核心序列。在所分离的片段中,其一致性很强的序列中都含有两个连续的胸腺嘧啶(T),进行多序列比对和构建隐马图分析结果也表明该核心序列至少含有两个连续的碱基T,核心序列可能为[TG][TG][CA]TT[AG][TC][TG]。本研究通过异源转化手段,蛋白表达以及CASTing技术,对EgrZFP7基因在巨桉非生物逆境响应中的功能和调控机制,进行初步研究,丰富了巨桉非生物逆境抗性相关分子机制,为巨桉抗逆分子辅助育种工作提供了一定的理论参考。