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在雌性哺乳动物中,卵巢是其重要的生殖器官,然而在卵巢中绝大部分(-99%)的卵泡最终闭锁。尽管卵泡发生是一个持续过程,但是卵泡闭锁却通过阻止卵泡排卵来影响各个阶段卵泡的生长及发育,从而调控繁殖相关活动。根据大量研究表明,颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁发生的主要诱因,凋亡的颗粒细胞调控卵泡的发育,导致其闭锁,影响哺乳动物的繁殖机能。MircoRNAs(miRNAs)是一类内源约18-23nt的非编码小RNA,这类RNA在转录后调控导致基因沉默中有重要作用。miRNAs广泛参与各种生物和细胞过程,主要包括细胞发育,细胞增殖,细胞凋亡。然而,miRNAs参与调控颗粒细胞凋亡的分子机制仍有待深入研究。本文通过形态鉴定以及孕酮和雌二醇激素测定确定猪卵泡闭锁程度,并进一步将卵泡分为健康卵泡,轻度闭锁卵泡和重度闭锁卵泡。在此基础上采用Stem-loop RT-PCR定量let-7 miRNA家族在健康卵泡,轻度闭锁卵泡和重度闭锁卵泡中的表达情况,并通过细胞培养,流式细胞术,定量PCR、免疫荧光染色、蛋白质印迹等技术,研究了在体外培养的猪颗粒细胞中过表达let-7g模拟物(let-7 mimic)对其凋亡情况和凋亡相关基因的影响,实验结果表明:1)Stem-loop RT-PCR 定量检测表明,let-7 miRNA 家族中 let-7a,let-7b,let-7c和let-7i丰度随着闭锁程度增加而降低;let-7g却在闭锁过程中表达增加。这一结果与之前对不同闭锁程度卵泡进行mirnaassay芯片分析中let-7 miRNA家族表达规律结果一致,提示let-7 miRNA家族参与调控猪卵泡闭锁过程。2)研究体外转染发现转染let-7g mimic的猪颗粒细胞凋亡率显著增加,说明miRNA let-7g促进颗粒细胞凋亡。为了进一步验证该结果,转染let-7gmimic后,对颗粒细胞中凋亡相关基因FasL,Bax,Bcl2,Mcl1和Caspase-3的mRNA水平进行定量PCR分析,结果表明let-7g在猪卵泡颗粒细胞过表达对FasL的表达没有显著变化,而促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达显著增加,抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达显著降低。此外,let-7g的过表达引起FoxO1基因mRNA水平升高并且FoxO1蛋白去磷酸化入核,发挥其转录调控活性。3)双荧光素酶系统试验证明,MAP3K1是1et-7g的直接靶基因;用siRNA敲减MAP3K1在颗粒细胞中的表达,引起颗粒细胞的凋亡增加,且同样引起FoxO1基因mRNA水平升高并且去磷酸化入核,从而推测,let-7g通过抑制MAP3K1转录水平,引起FoxO1去磷酸化入核,促进下游凋亡基因表达,进而引起凋亡。本实验阐明了在猪卵泡闭锁过程中let-7 miRNA家族表达变化规律,并研究说明let-7g引起颗粒细胞凋亡的分子机制。本论文进一步探索miRNA介导颗粒细胞凋亡的调控机制,更加深入阐明表观遗传学对猪卵泡闭锁的影响,为重要经济家畜的遗传育种与繁殖研究提供了有价值的参考。