干细胞标记物OCT4在肾癌中的表达及临床意义

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目的采用免疫组织化学法(IHC)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法和蛋白印迹技术(Western Blotting)等生物学实验技术,检测干细胞转录因子OCT4在肾癌和癌旁组织中是否表达及其表达水平,并比较OCT4在肾癌组织和癌旁肾组织中表达水平的差异,分析其与性别、年龄及预后的相关性,探讨其可否作为肾细胞癌诊断的标记物。方法收集资料完整的行根治手术切除的肾癌及癌旁组织标本63例,均为肾脏透明细胞癌,术前未接受放化疗及免疫抑制剂治疗,离体组织均在30min内放入-80℃冰箱冻存。正常对照选取远离肿瘤(>5cm)或肿瘤切缘基底部的正常肾脏组织。采用免疫组化检测OCT4在肾癌及癌旁组织的表达,并做统计学分析。同时分别提取组织中的总RNA和总蛋白,用RT-PCR及Western Blotting的方法检测mRNA样品和蛋白质样品中干细胞转录因子OCT4的表达情况,凝胶图像处理系统分析目标条带的RNA片段的长度和蛋白质分子量,分析OCT4与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤TNM分期的关系,并作预后分析。数据处理均用SPSS17.0软件包完成,最后根据实验结果分析OCT4在肾癌和癌旁组织的表达情况,并探讨其与临床的相关性。结果1、免疫组织化学结果显示肾癌组织中OCT4的阳性表达为45例(71.4%),其中11例+,19例++,15例+++;癌旁组织为6例(9.5%),4例+,2例++。OCT4在肾癌和癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。2、RT-PCR结果示OCT4基因在肾癌组织中表达,在癌旁组织中低表达或不表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3、Western Blotting结果显示OCT4蛋白在肾癌组织中高表达,而在癌旁组织中低表达或不表达,两者差异有统计学意义(P<0.05)。而在与性别、年龄、瘤体大小等比较时结果示无明显相关。术后随访5年,肾癌相关死亡为12例,其中Ⅱ期2例,Ⅲ期5例,Ⅳ期5例,该12例死亡患者中OCT4蛋白均呈阳性表达。且死亡病例中OCT4蛋白在Ⅲ、Ⅳ期中的表达显著高于Ⅰ、Ⅱ期的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、干细胞转录因子OCT4蛋白和基因在肾癌组织中异常高表达,在癌旁组织中低表达或不表达。2、OCT4的阳性表达和临床分期及预后紧密相关,恶性程度越高,其表达强度亦随之增高,且OCT4的强阳性表达往往提示患者有较差的预后。3、OCT4和肾细胞癌的发生发展密切相关,参与肾癌生物学行为的调控,可能作为诊断肾癌新的有价值的分子标记物,将来能否广泛应用于临床尚需进一步研究。
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