Livin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Protein, IAP)家族的重要成员,在多种恶性肿瘤中呈现高表达,在绝大多数正常组织中不表达。Livin是一种能抑制细胞凋亡的细胞核蛋白,它能与胱天蛋白酶-3,7,9(caspase-3,7,9)结合,抑制caspase活性,阻断死亡信号的转导。由于Livin具有抑制caspase的活性,因而肿瘤细胞内Livin的过表达在对肿瘤细胞耐受药物诱导的凋亡过程中起着关键性作用。本课题组以前通过RT-PCR的方法从分子水平对Livin在膀胱移行细胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder, TCC)组织中的表达进行检测,证明Livin在TCC的发生发展过程中起到重要的作用。本研究进一步从蛋白水平对livin在TCC中的表达进行检测,完善对人体膀胱癌组织的研究。目的:研究一种新的凋亡抑制蛋白Livin在TCC组织中的表达,及其与TCC的病理分级、临床分期、初发复发和单发多发之间的相关性。方法:将开放手术切除的标本,经冷冻、切割、定点选取等处理后,用自制的阵列制作仪,在组织阵列载体上,以一定顺序,固定间距制成冰冻组织微阵列。1.采用免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining, IHC) (通用型二步法),在完全相同的实验条件下检测50例(分为初发浅表组、初发浸润组、复发浅表组、复发浸润组和正常对照组,每组各10例)冰冻标本中Livin的表达情况。2.采用Western blotting及蛋白灰度分析的方法,对上述50例样本进行定性及半定量检测Livin的表达情况。3.利用统计学分析Livin的表达与TCC的病理分级、临床分期、初发复发和单发多发之间的相关性。结果:1、免疫组织化学:10例正常膀胱组织细胞中无livin阳性表达,而40例TCC组织标本中有34例livin阳性表达,阳性率为85%,两者相比差异具有显著性(P<0.01)。按WHO病理分级分组比较发现Livin蛋白的阳性表达率在不同分级间差异无显著性(P>0.05)。浸润性组和浅表性组的livin蛋白阳性率经比较差异具有显著性(P<0.05)。2、Western blotting:在收集的40例TCC标本中有效标本37例,其中livin蛋白表达阳性标本35例,阳性率为95%;正常对照组无livin蛋白表达,实验组与对照组之间差异具有显著性(P<0.01)。通过对35例TCC阳性标本livin蛋白条带及其对应的β-actin条带分别进行灰度分析并算出比值后,经正态检验符合正态分布,按初发浅表、初发浸润、复发浅表和复发浸润分四组行方差分析,结果显示四组之间差异具有显著性,具有统计学意义(F=5.926,P=0.003)。说明浅表组与浸润组之间、初发组与复发组之间差异具有显著性。按肿瘤病理分级和单发多发分组分别进行方差分析发现livin的表达与肿瘤的病理分级、单发多发之间无显著性差异(P>0.05)。结论:本研究通过使用免疫组化和Western blotting两种方法,其结果一致,都说明livin在正常膀胱组织中不表达而在TCC组织中高表达,且浅表组与浸润组、初发组与复发组之间差异具有显著性,而在病理分级分组之间、单发多发分组之间无显著性差异。证明Livin在TCC的发生发展过程中起着相当重要的作用,在膀胱癌的治疗过程中,livin有望成为一种高效、敏感的瘤标,并且能对TCC的早期治疗提供基因治疗的新靶点。更重要的是对Livin进行检测可以了解患者的预后情况,有重点的对livin高表达的患者及早进行更全面的治疗,降低术后复发率,提高治疗效果及患者的生活质量,延长生命。