细胞周期后期促进复合物(APC/C)是一种泛素蛋白连接酶,在细胞周期中不同时相的有限更迭和顺利运转过程中发挥重要作用。APC是一个多亚基复合物,其通常需要和共激活因子Cdc20或Cdh1结合才表现出活性,共激活因子发挥着识别和招募APC底物的作用。目前研究认为Cdc20主要在细胞分裂期中期(metaphase)到后期(anaphase)阶段起作用,接着由Cdh1完成从细胞分裂期后期到G1期的过渡。在细胞周期进程中,APC/C Cdc20能够降解Securin(酵母中称之为Pds1)和一些B类周期蛋白家族成员(酵母中主要为Clb2和Clb5蛋白)。Securin是分离酶(separase)的抑制物,它被Cdc20降解并释放出分离酶后,连接姐妹染色单体之间的cohesin复合物将被分离酶切割从而导致染色单体分离。Cyclin B家族成员主要在细胞周期进程的S期和M期发挥着重要作用。伴随着这些底物蛋白的降解,APC/C Cdc20能够调控多种细胞生命活动,包括细胞的生长和分化。在APC/C中,Cdc20或Cdh1主要负责参与底物特定序列的识别从而导致底物降解。当前研究得比较清楚的两种序列分别是D-box和KEN-box,Cdc20对其两个关键底物Pds1和Clb5的降解均是通过它们的D-box基序来进行的。Cdc20对这些序列的识别是通过其羧基端的WD40(repeat)区域进行的,这个结构在Cdc20与其底物的识别互作中发挥关键作用。目前对于WD40区域中参与底物识别的精确位点还知之甚少,同时,Cdc20对不同底物D-box的识别是否有差异也不甚清楚,这些问题都需要进一步探索。本课题中我们选用酿酒酵母作为实验材料,研究Cdc20和底物的相互作用机制。通过研究,我们发现了Hsll很可能不是Cdc20的底物,并确立了Cdc20与Clb5互作的一些关键位点。我们的研究表明在细胞周期中Clb5的降解对于有丝分裂的退出是非必需的,在这个过程中可能是另一个周期蛋白Clb2发挥着必不可少的作用。同时,我们发现Cdc20对底物Pds1和Clb5的识别是有差异的。虽然识别Pds1的关键位点还需要进一步研究确认,我们的实验结果提示Cdc20对Clb5及Pds1的识别是依赖于其WD40区域的不同位点。本研究对Cdc20特异性识别底物的机制进行了初步探索,研究结果对将来进一步挖掘Cdc20的其他底物有一定的借鉴意义,并为将来体内潜在影响和调节APC活性的研究提供了基础及靶向目标。