Bt蛋白在褐飞虱体内的分布及对体内相关酶活性的影响

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本研究通过对Bt蛋白胁迫下褐飞虱(Brownriceplanthopper)体内相关酶,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、FE酯酶、羧酸酯酶(CES)活性及不同部位酶活变化的研究和探讨,为Bt水稻对非靶标生物的安全性评价提供依据;利用室内建立以转CrylAb基因水稻(汕优63)饲养褐飞虱,不同时间段取样测定其体内各个部位酶活力及酶总活力,通过酶联免疫法(ELISA)检测转CrylAb基因水稻饲养的褐飞虱,利用差速离心法获取褐飞虱的各个细胞结构,运用分光光度计法和酶标仪法对褐飞虱体内及细胞碎片、线粒体及亚细胞器等结构的酶活力情况进行检测。结果表明:1.室内种植的转CrylAb基因水稻(汕优63)中,通过CrylAb蛋白检测试剂盒检测,含有CrylAb蛋白12.8385 ng/L2.取食转CrylAb基因水稻后,褐飞虱体内CrylAb蛋白在细胞碎片、线粒体和亚细胞器中内均有分布,不同细胞部位,Bt蛋白的含量:亚细胞器>线粒体>细胞碎片,且1d-15d内褐飞虱体内中3个部位都能检测到CrylAb蛋白。3.在CrylAb蛋白胁迫下,褐飞虱体内,0d-15d中,褐飞虱体内总CAT酶活性先降低,后增加,10d降到最低值,15d又出现快速增加恢复;GST酶活性,也是先降低,后逐渐增加,进食第5d降到最低值,之后一直增大;POD酶活性则是先增加,后降低,随着取食时间的延长恢复到饲养Bt水稻前的酶活性水平;褐飞虱体内SOD酶活性,则随取食时间的延长,褐飞虱体内的SOD酶活性略有增加;褐飞虱体内酯酶总活性,随取食时间的变化,CES酶活性逐渐降低,AchE酶活性先增加,后降低,恢复到未饲养Bt蛋白水稻前的酶总活力水平,然而FE酶活性,随取食时间的延长,褐飞虱体内的FE酶活性一直降低。4.综合分析在取食CrylAb蛋白水稻后,褐飞虱体内及不同部位的POD、GST、CAT、 SOD、CES、AchE、FE等酶活性变化,在受到外来蛋白(或活性物质)刺激作用下,会出现一个相应的生化反应的过程,造成不同功能酶的活性变化,甚至与对照组相比有显著性差异变化。但随着取食时间的延长,这种酶活性的变化又逐渐恢复到初始水平。其原因可能是生物自身免疫系统对外来物做出的一种自我保护的生理反应;也可能是CrylAb蛋白随着食物链进入生物体后,对生物活体某些机能有一定的毒性作用,造成生物体做出应激性的生理保护反应,来中和或减缓其对机体的毒害作用。
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