活性氧在抗辐射菌增殖和辐射抗性中的作用

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抗辐射菌(Deinococcus Radiodurans,Dr)是一种对电离辐射具有显著抗性的微球菌,其辐射抗性机制未十分明了。电离辐射可激发水分子产生大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),ROS是超氧阴离子(O2·-),过氧化氢(H2O2),羟自由基(HO·),一氧化氮(NO)等活性含氧化合物的总称。不同浓度ROS对Dr的作用与Dr的辐射抗性的关系是本课题探讨的内容。 利用细胞色素C还原法测定正常状态下和受不同剂量照射后Dr的O2·-释放,用3H-TdR掺入法测定Dr的增殖。加入NADPH氧化酶抑制剂DPI,观察在同样条件下Dr的O2·-释放和增殖的变化。利用激光共聚焦显微镜测定受照后Dr内H2O2浓度变化。结果表明Dr中O2·-、H2O2的释放与其增殖有关,DPI可专一抑制O2·-的释放和Dr.的增殖;较小剂量(<1KGy)照射能刺激Dr增殖并释放O2·-、H2O2,较大剂量下该效应被抑制。 将Dr接受不同剂量的60Co γ射线照射,照后立即测定菌体内的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。并以大肠杆菌为对照。发现Dr内SOD和CAT活性大于大肠杆菌,而且受大剂量γ射线作用后会进一步升高,其中CAT活性变化较明显。将编码Dr和大肠杆菌的SOD和CAT基因进行两两序列对比,发现编码两者SOD的序列同源性为76%,而编码CAT的序列间同源性较低。提示高浓度ROS可诱导Dr内SOD、CAT合成,该效应在Dr的辐射抗性中起一定作用,且CAT活性可能较为重要。 采用试验手段提高和抑制Dr内CAT活性,并将其接受60Co γ射线照射。用平板菌落计数法和DNA解旋荧光法(FADU法)测定Dr生存率和DNA受损情况,结果表明CAT活性提高后Dr生存率提高,DNA受损程度较轻,而CAT活性被抑制后Dr生存率降低,DNA受损程度较重。提示诱导合成CAT是Dr受高浓度ROS作用后重要的自我保护机制之一。
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