目的：食管癌在全世界的癌症发病率中占第7位，中国河北省南部地区则是全世界食管癌致死率最高的地区之一，每年的致死率超过100/100,000。目前，治疗食管癌的方法有手术治疗、放疗及化疗。近来，流行病学研究显示服用非甾体类抗炎药（NSAID）能降低食管癌的死亡率。认为NSAID可以作为预防食管癌的一种药物。　　众所周知，NSAID的作用是抑制环氧合酶（COX），此酶是花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶。而前列腺素，如PGE2能促进恶性细胞的增殖、抑制凋亡和抑制免疫。COX有两种同工酶，COX-1和COX-2，COX-1稳定表达于许多组织，COX-2是诱生酶，可被生长因子和肿瘤促进因素等多种因素诱导产生。现已证实，在食管癌组织中COX-2的表达上调，COX-2抑制剂和其它NSAID类药物能抑制食管癌细胞的增殖和诱导凋亡。　　在炎症和哮喘发病机制中，NF-κB下游调节COX-2是其机制之一，然而，这一途径在癌症中尚未证实。而且，NSAID的抗癌机制仅在体外细胞培养中得到证明，在癌症病人中还未阐述。本研究将观察选择性COX-2抑<WP=4>制剂，莫比可（Mobic），对食管癌的影响，以阐述 COX-2抑制剂在体内的抗癌机制。方法：1. 研究对象：选取2001年3月至2002年9月，河北医科大学第四医院胸三科53例食管鳞状上皮细胞癌连续病例，其中，男性40例，女性13例，平均年龄57.3岁（35-75岁），随机分成实验组25例，对照组28例。实验组患者每日口服莫比可7.5毫克，共服用10~14天，对照组未服用莫比可。所有患者术前均未经过放疗和化疗。取材时，手术标本离体后立即置入液氮中，然后-80℃冰箱贮存备用或70%乙醇中固定后，4℃冰箱贮存备用。2. 蛋白印迹法（Western blot）检测COX-2和IκB-α：提取食管癌组织中的胞浆蛋白，福林-酚试剂法测定胞浆蛋白浓度，10%SDS-PAGE电泳，转膜，封闭、一抗兔抗人COX-2 IGg多抗（1:50）或兔抗人IκB-α IGg（1:100）多抗孵浴、二抗辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IGg（1:1000）孵浴、DAB显色。3. 电泳迁移率改变分析（EMSA）检测食管癌组织NF-κB活性：提取食管癌组织中的核蛋白，福林-酚试剂法测定核蛋白浓度，采用末端标记法将NF-κB的DNA结合位点(5，-AGT TGA GGG GAT TTT CCC AGG C-3，, 3，-TCA ACT CCC CTG AAA GGG TCC G-5，)标记上[γ32P]ATP，采用乙醇沉淀法去除未结合标记物，4%聚丙烯酰胺凝胶电泳，压片于 -70℃放射自显影72小时。4. 逆转录-聚合酶链反应（RT-RCR）检测COX-2基因的表达：用Trizol提取食管癌组织总RNA，用RT-PCR酶混合物进行RT-PCR。引物序列：COX-2序列5，-TTC<WP=5>AAA TGA GAT TGT GGG AAA ATT GCT-3，（上游），5，-AGA TCA TCT CTG CCT GAG TAT CTT-3，（下游），PCR产物为303bp；β-actin序列5，-GTT TGA GAC CTT CAA CAC CCC-3，（上游），5，-GTG GCC ATC TCC TGC TCG AAG TC-3，（下游），PCR产物为318bp。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶中电泳，用凝胶呈像分析系统照相并分析结果。5. 流式细胞术检测凋亡率 ：制备单细胞悬液，碘化丙啶（PI）染色，采用美国Becton Dickson公司的FACS420型流式细胞仪，激发波长488nm，进行单参数检测，输入HP-300Contrast30计算机进行处理，测出凋亡率（AR）。6. 统计方法：成组设计的两样本均数比较的t检验进行统计学分析。结果：1. 莫比可对IκB-α表达的影响 ：在对照组中无蛋白条带或很弱的蛋白条带产生；而在实验组中有明显的蛋白条带或稍弱的蛋白条带产生。根据Gel Pro 分析的结果显示, 服用莫比可组较空白对照组的IκB-α表达明显增高（P<0.01）。2. 莫比可对NF-κB活性的影响 ：实验组的放射自显影条带强度明显小于对照组。Gel Pro分析值也表现出两组差异（P<0.01）。3. 莫比可对COX-2mRNA的影响：在对照组可看到COX-2 mRNA条带显著，而在实验组中其条带相对不明显；经Gel Pro软件分析的两组COX-2/β-actin比值差异显著（P<0.01）。4. 莫比可对COX-2蛋白表达的影响：通过蛋白条带强弱可以看出服药组的COX-2蛋白表达低于未服药组；经Gel Pro 分析得出的两组IOD值比较有显著差异（P<0.01）。5. 莫比可对凋亡率的影响：应用流式细胞学技术测定两<WP=6>组组织的凋亡率（AR），服用莫比可组凋亡率明显高于未服药组（P<0.01）。结论：1. 本研究结果中，应用莫比可组的IκB-α在细胞浆中的表达明显高于服药组，而NF-κB的活性却低于未服药组。表明莫比可可抑制NF-κB信号传导途径，首先是抑制IκB-α降解，进而进一步抑制NF-κB转移至细胞核。2. 应用RT-PCR测定COX-2 mRNA和Western blot检测COX-2的结果均表明在莫比可组COX-2的表达明显低于未服用组，再结合前述NF-κB活性被莫比可所抑制，故认为莫比可通过抑制NF-κB的活性从而抑制了COX-2的表达。3. 本实验还研究了莫比可对凋亡的作用。目前研究认为COX-2抑制剂诱导凋亡的机制有多种途径，本实验通过流式细胞技术检测凋亡率,证实服用莫比可组凋亡率显著增加，与前述COX-2表达降低关系密切；当然也不能排除莫比可抑制NF-κB的活性，NF-κB活性降低，直接激活抗凋亡基因作用减弱，从而引起服用莫比可组凋亡率增加，但由于这些抗凋亡基因本实验未检测，此