论文部分内容阅读
再生障碍性贫血(简称再障)由于发病机制至今尚不完全明了，长期困扰着临床，成为临床血液病诊治的一个难题，严重危害儿童健康。近年来随着免疫学、细胞及分子生物学的迅速发展，人们对再障的发病机制有了更进一步的认识。新近研究表明骨髓造血受一些因子及其受体的调控，这些细胞因子中最受瞩目的是干细胞因子(stem cell factor，SCF)及其相应受体(c-kit)。但以往研究结论不一致，且有关受体的研究多集中在膜结合形式，可溶性形式则较少涉及，而正常足月新生儿和再障儿童血浆中可溶性c-kit水平测定国内外尚未见报道。 目的：本研究以再障患儿、正常足月新生儿脐血及正常儿童血浆作为实验对象，通过酶联免疫双抗体夹心法检测再障患儿血浆、正常足月新生儿脐血血浆可溶性c-kit受体(SCD117)及SCF水平测定，并与正常儿童进行比较，探讨可溶性c-kit及SCF在再障患儿、正常足月新生儿脐血血浆与正常儿童中水平有无差异，可溶性c-kit及SCF在再障发病机制中的作用。 方法：取正常足月新生儿脐静脉血或再障及正常儿童外周静脉血3-5ml于无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，标本1500r／min离心15分钟后取上清按实验程序无菌分装，置-80℃冰箱冻存待检。采用ELISA双抗体夹心法测定可溶性C-Kit及SCF。可溶性c-kit (DIACLONE，FRANCE)批内变异奇数＜6％，批间变异奇数＜7.9％。检测的灵敏度为0.095ng／ml，标准曲线线性范围为0.312-10.00ng／ml，线性相关系数R=0.98。SCF(R&D公司，美国)检测灵敏度为9.0pg／ml，批内变异系数＜4％，批间变异系数＜10.3％，双对数坐标作对数线形曲线范围为31.2-2000pg／ml。操作步骤严格按照说明书进行。检测仪为英诺威生2003年硕士学位论文血浆可溶性c一Kit及SCF水平在再生障碍性贫血患儿发病机制中的作用研究绘制标准曲线。 结果:①可溶性c一kit浓度测定结果:正常儿童对照组血浆c一kit水平为(16.81士5.51)ng/ml，AA可溶性e一kit水平为(13.02士6.16)ng/ml，正常足月新生儿脐血血浆可溶性C一kit水平为(19.03士5.85) ng/ml。正常足月新生儿脐血组>正常儿童组>再障儿童组，再障儿童组与正常儿童组比较，差异有显著性(P<0 .01)，再障儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异有显著性印<0.01)，正常儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异无显著性(P>0.05)。②可溶性scF浓度测定结果:正常对照组血浆SCF水平为(468.24士147.21)ng/ml，AA可溶性SCF水平为(363.53士134.31)ng/ml，正常足月新生儿脐血血浆SCF水平为(560.16士200.94) ng/ml。正常足月新生儿脐血组>正常儿童组>再障儿童组，再障儿童组与正常儿童组比较，差异有显著性(p<0 .05)，再障儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异有显著性(p<0 .01)，正常儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异无显著性(p>0 .05)。③血浆可溶性c一kit及SCF浓度测定结果一致，均为正常足月新生儿脐血组>正常儿童组>再障儿童组，再障儿童组与正常儿童组比较，差异有显著性，再障儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异有显著性，正常儿童组与正常足月新生儿脐血组比较，差异无显著性。 结论:①再障患儿SCF水平低于正常儿童，提示再障骨髓基质细胞的数量减少而造成SCF分泌量下降。②再障患儿可溶性C一kit水平低于正常儿童，而再障造血干祖细胞表面c一kit受体表达正常，提示再障患儿可溶性c一kit水平降低可能由于造血干祖细胞数量减少导致可溶性c一kit受体生成减少。③正常足月新生儿脐血血浆可溶性c一kit和SCF均高于再障儿童，支持正常足月新生儿脐血含有更多更原始的造血干细胞及增殖调控因子。④正常足月新生儿脐血血浆可溶性c-kit和SCF均高于正常儿童，但未出现显著差异的结果，可能原因为病例偏少，故仍需进一步探讨。⑤造血干祖细胞增殖调控因子SCF与其相应受体的可溶形式sc--kit在再障儿童、正常儿童、正常足月新生儿脐血血浆的浓度相一致，提示可溶性c一kit通过与SCF结合来调节或阻止SCF刺激造血细胞生长的能力。