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目的：构建mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在胶质瘤治疗中的应用提供基础。观察慢病毒介导MicroRNA对胶质瘤细胞的生物学效应。方法：采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRRNA VECTOR扩增目的基因mir-7-3,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒Lt-GFP-RNAi VECTOR[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒Lt-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将Lt-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和EGFP基因的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和人胶质瘤细胞U251,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肿瘤细胞内源性EGFR. AKTmRNA及蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测细胞增殖活性和增殖周期。结果：Lt-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察EGFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地转导入U251,并可明显降低肿瘤细胞内源性AKT2和EGFR表达水平,对细胞增殖活性和增殖周期有明显抑制作用。结论：RNAi技术通过抑制肿瘤细胞内源性AKT2和EGFR表达水平而逆转人胶质瘤细胞系U251恶性表型,基于mir-7-3的慢病毒基因干扰技术可望成为胶质瘤基因治疗的有效手段之一。