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目的:IL-22是一种主要由先天性淋巴细胞和CD4+T辅助细胞分泌的细胞因子。近年来研究表明IL-22具有宿主防御、促进组织保护和再生等多种功能。最近有研究报道，在二型糖尿病小鼠中，IL-22可以减轻胰腺β细胞的内质网应激，从而恢复血糖平衡。因此IL-22被认为是一种潜在的蛋白治疗药物。本研究的目标是优化外源蛋白IL-22在大肠杆菌中的表达条件，为工业化生产奠定基础。并在体外培养的人肝癌细胞系(HepG2)和小鼠肝病模型中检测其治疗效果。
方法:设计并合成重组质粒pET28a-IL-22，将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，并探究其诱导温度、时间和IPTG浓度对表达量的影响以及SUMO促可溶标签对蛋白可溶性的影响，经变性、复性和镍柱亲和层析纯化获取高纯度的重组蛋白，通过HepG2细胞增殖实验检测其体外生物学活性，在3月龄肝炎小鼠中连续五周的腹腔注射IL-22检测其治疗效果，每周两次。
结果:在BL21(DE3)诱导表达出分子量约为16.7kDa的目的蛋白，主要以包涵体的形式表达且SUMO促可溶标签对其可溶性影响较小。包涵体经过变复性以及亲和层析纯化得到纯度可达90％以上IL-22重组蛋白，其产量达到130mg/L。实验结果表明IL-22可促进HepG2细胞增殖(P＜0.05)，值得一提的是在小鼠肝炎模型中没有达到减轻炎症的治疗效果，而是加重了炎症。
结论:1pET28a-IL-22/BL21能够高效表达IL-22重组蛋白，并筛选出了最佳诱导条件，经过变性，复性和纯化后得到了具有生物学活性的高纯度目的蛋白，最后详细讨论了IL-22的应用价值和开发生产系统的经济可行性。
方法:设计并合成重组质粒pET28a-IL-22，将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，并探究其诱导温度、时间和IPTG浓度对表达量的影响以及SUMO促可溶标签对蛋白可溶性的影响，经变性、复性和镍柱亲和层析纯化获取高纯度的重组蛋白，通过HepG2细胞增殖实验检测其体外生物学活性，在3月龄肝炎小鼠中连续五周的腹腔注射IL-22检测其治疗效果，每周两次。
结果:在BL21(DE3)诱导表达出分子量约为16.7kDa的目的蛋白，主要以包涵体的形式表达且SUMO促可溶标签对其可溶性影响较小。包涵体经过变复性以及亲和层析纯化得到纯度可达90％以上IL-22重组蛋白，其产量达到130mg/L。实验结果表明IL-22可促进HepG2细胞增殖(P＜0.05)，值得一提的是在小鼠肝炎模型中没有达到减轻炎症的治疗效果，而是加重了炎症。
结论:1pET28a-IL-22/BL21能够高效表达IL-22重组蛋白，并筛选出了最佳诱导条件，经过变性，复性和纯化后得到了具有生物学活性的高纯度目的蛋白，最后详细讨论了IL-22的应用价值和开发生产系统的经济可行性。