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目的观察Betulinic acid （BetA）对人低分化鼻咽癌CNE2细胞在体外培养中的影响，探讨这种影响是否为凋亡，以及可能的信号通路，为BetA应用于鼻咽癌的治疗提供实验依据。方法将5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL BetA与CNE2共同孵育48小时，用AV/PI染色，用Etoposide为阳性对照，使用流式细胞仪分析，观察细胞是否为凋亡；用Caspase荧光底物Ac-DEVD-AFC (caspase-3)和Ac-LEHD-AFC (caspase-9)来检测caspase的活性，actin作为对照；观察在此过程中，caspase-3是否裂解；提取CNE2细胞基因组，测试DNA梯形条带；通过Western blot检测Cyt c的释放，使用COX IV作为阳性对照；结果1.在5μg/mL,10μg/mL和20μg/mL的BetA处理后，AV/PI双重阳性细胞分别为29.7%，41.3%和80.3%。单独AV染色阳性率分别是87.5%，84.7%和80.9%。2.在BetA处理后的CNE2细胞中，caspase-3和caspase-9均被激活，并与BetA具有浓度依赖性。caspase-3因激活被切割为19KDa片段。3. DNA梯形条带显示DNA梯形条带形成。4. BetA可以导致Cyt c释放到胞浆，Cyt c释放与BetA呈浓度依赖关系。结论BetA可以有效导致CNE2细胞死亡，这种死亡是典型的凋亡，这种凋亡发生与caspase激活有关，并导致Cyt c的释放。目的观察Betulinic acid （BetA）对人低分化鼻咽癌CNE2产生的凋亡中，Bcl-2/Bcl-xL和Bax/Bak在此凋亡中的作用，以及mPTP抑制剂对此凋亡的影响。为Betulinic acid （BetA）应用于鼻咽癌的治疗提供实验依据。方法分别使用pcDNA3.1-Bcl-2和pcDNA3.1-Bcl-xL质粒转染CNE2细胞，使Bcl-2和Bcl-xL高表达，G418筛选稳定细胞株，并用Western blot验证转染效果。待转染成功后，将上述两组细胞和野生型CNE2细胞分别加入20μg/mL BetA，共同孵育48小时。比较BetA诱导三组细胞产生死亡细胞数量，使用AV/PI染色，用流式细胞仪计数AV/PI双阳性细胞数量；使用抗激活Bax抗体检测BetA是否能激活Bax，使用Etoposide作为阳性对照，使用荧光激光共聚焦显微镜下观察；使用针对Bax及Bak的shRNA克隆进pSuper载体后，用Lipo2000转染CNE2细胞，使用G418筛选稳定细胞株，Western blot验证RNAi效果，用Western blot检测野生型CNE2细胞和Bax/Bak表达调低细胞释放Cyt c；将CsA和BKA分别加入用20μg/mL BetA处理过的CNE2细胞中1h，使用InnoCyte Flow Cytometric Cytochrome c Release Kit检测Cyt c释放。结果1. Bcl-2或Bcl-xL高表达CNE2细胞比野生型CNE2细胞凋亡数量明显减少；2.在BetA处理后CNE2细胞，使用抗激活Bax抗体，在激光共聚焦显微镜下未见细胞显色。3.在BetA处理后的CNE2细胞中，Bax/Bak调低表达后的细胞与野生型细胞Cyt c的释放差异不显著；4.加入CsA和BKA到BetA处理后的CNE2细胞中，Cyt c释放减少。结论BetA诱导CNE2细胞凋亡过程中，Bcl-2/Bcl-xL高表达可以抑制细胞凋亡以及Cyt c的释放；在此过程中Bax未激活；BetA诱导CNE2细胞Cyt c释放可能与线粒体通透性转换孔（mPTP）有关。