论文部分内容阅读
阪崎肠杆菌会引起严重的新生儿脑膜炎、菌血症、小肠结肠炎;而且它能够引起神经功能紊乱,并造成严重的后遗症,死亡率高达20%-50%以上。阪崎肠杆菌目前已经引起世界范围内的广泛关注。本试验研究了乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的制备方法。本研究以一级标准物质技术规范(JJG 1006-94)为准则,并且遵照中华共和国出入境检验检疫行业标准中“奶粉中阪崎肠杆菌检验方法--第1部分:分离与计数方法”的操作规范来进行本试验。由于适合的保护剂对阪崎肠杆菌标准物质的冻干保存很重要,所以本试验首先设计了一个保护剂试验来挑选最适合阪崎肠杆菌标准物质冻干保存的保护剂。试验选择了三种保护剂进行比较:奶液(20g奶粉+80mL无菌水);营养肉汤100mL+7.5g葡萄糖;0.1mol/L磷酸盐缓冲液100ml+L-谷氨酸钠3g+乳糖5g+聚乙烯吡咯烷酮6g。先将阪崎肠杆菌分别加到三种保护剂中,分装到安瓿瓶中,预冻后进行冷冻干燥,做生化试验,然后定期检测各保护剂的含菌量。结果表明脱脂奶粉对阪崎肠杆菌的保护效果最好。此后,继续定期检测以脱脂奶粉作为保护剂的安瓿瓶中菌量,以检测其稳定性。接到营养肉汤中的阪崎肠杆菌在过夜培养后,浓度一般在108左右,将其稀释到105,并从中取2ml菌液加到奶液(40g脱脂奶粉+160ml无菌水)中,倒入灭菌小瓷盘并在-70℃预冻18-24h,冷冻干燥48-60h,装到均质袋中并均质器中拍打均匀;从中取10g奶粉+90ml无菌水,测其菌量;而后根据加菌奶粉的含菌量,用新鲜脱脂奶粉对其进行稀释,最终将其菌量稀释到100g脱脂奶粉中仅含有数百个阪崎肠杆菌,并将这些奶粉分装成最小单位(10g),抽真空保存,并对这些制成的标准品进行稳定性试验和均匀性试验。结果表明稳定性和均匀性都符合标准物质的标准,其中两次均匀性试验的F值分别为1.759和0.548。阪崎肠杆菌标准物质制备完成以后,要进行不确定度的评定。影响标准物质制备的不确定度有很多,本试验对有重要影响的不确定度进行评定,主要是菌落计数、乳粉中阪崎肠杆菌标准物质定值方法、电子天平的不确定度。阪崎肠杆菌菌落计数的不确定度为0.06429;标准物质定值方法的不确定度为11.508;电子天平的合成标准不确定度U为1.42518,其扩展不确定度为2.79335。此外,本实验对预冻后及冷冻干燥后阪崎肠杆菌标准物质的生化特性进行检测,结果表明其生化特性没有发生变化。