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多氯联苯(PCBs)是一类人工合成的有机氯化合物,它具有优良的物理化学性质,曾经广泛的应用于工业生产中。虽然PCBs已经被禁止使用了近40年,但仍能在环境的各个角落检测到它的存在。PCBs在环境中难降解,并具有生物蓄积性和高毒性,给生态环境和人类健康带来了巨大的威胁。PCBs也因此成为各个国家和地区重点监测的污染物之一。目前检测PCBs的主要方法为气相色谱法,但该方法对样品前处理要求苛刻,所需仪器价格昂贵,检测成本高,检测周期长,不适合对样品的快速高通量分析检测。而免疫分析方法具有操作简单、成本低、灵敏度高、能够实现对目标分子的快速高通量分析检测等优点,目前已广泛的用于环境污染物的分析检测。因此,建立快速简便的免疫分析方法来检测PCBs具有重要的意义和广阔的应用前景。本文制备了三种分别针对PCB12、PCB37和PCB77的多克隆抗体和一种抗PCB37的单克隆抗体,在此基础上建立了检测PCB12、PCB37、PCB77的间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA);将制备的抗体进行生物素化处理,建立了检测PCBs的生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法(BA-ELISA);将不同的抗体和DNA修饰在金纳米颗粒(GNPs)表面,制备了多种抗体-GNPs-DNA探针,用于取代传统免疫PCR中的抗体-DNA结合物,基于这些探针,建立了基于实时荧光定量免疫PCR(rt-IPCR)的生物条形码方法(BCA)来检测环境中的PCBs。将这些方法用于实际环境样品中PCBs的分析检测,取得了满意的结果,为实现快速、高通量分析检测环境中的PCBs提供了可靠的技术支撑。主要研究结果如下:(1)以牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,分别用活化酯法和混合酸酐法制备了三种PCBs单体的人工免疫原和包被原,产物通过紫外光谱扫描分析确定半抗原与蛋白质成功偶联;通过免疫新西兰大白兔,制备了三种分别抗PCB12、抗PCB37和抗PCB77的多克隆抗体,所得的抗体特异性较好,效价较高,均能达到1:256000;本文还通过免疫小鼠,细胞融合,杂交瘤细胞培养,采集腹水,制备了抗PCB37单克隆抗体,和多克隆抗体相比,该抗体对PCB37的特异性更好。(2)利用所获得的抗体,分别建立了检测pcb12、pcb37和pcb77的ic-elisa方法。优化了抗原抗体浓度,温育时间,封闭液,有机溶剂,盐离子强度,ph值等实验条件,在最佳实验条件下,分别建立了检测pcb12、pcb37和pcb77的标准曲线;基于多克隆抗体,该方法对这三种pcbs单体的lod分别为0.016μgl-1、0.048μgl-1、0.063μgl-1。基于单克隆抗体,该方法对pcb37的lod为0.027μgl-1;将该方法用于海底沉积物样品中pcbs的分析检测,回收率均在81%-115%的范围内,变异系数(cv)均小于15%。(3)将抗体进行生物素化预处理,利用生物素-亲和素生物系统,分别建立了检测pcb12、pcb37和pcb77的ba-elisa方法。优化了包被原及生物素化抗体浓度,sa-hrp浓度,抗原抗体反应时间,生物素化抗体与sa-hrp反应时间等实验条件,同时还讨论了有机溶剂浓度,反应介质中ph值及盐离子浓度对实验的影响;在最佳实验条件下,分别建立了检测pcb12、pcb37和pcb77的标准曲线;基于多克隆抗体,该方法检测pcb12、pcb37和pcb77的ic50分别为0.53μgl-1,0.68μgl-1,1.36μgl-1;lod分别为4.5ngl-1、17ngl-1、18ngl-1;基于单克隆抗体,该方法检测pcb37的ic50为0.27μgl-1,lod8ngl-1;将建立的方法用于带鱼样品中pcbs的分析检测,加标样品中pcb12、pcb37和pcb77的回收率均在81%-113%之间,cv均小于15%。(4)分别用羊抗兔igg、羊抗小鼠igg及dna修饰15nm的gnps,制备了羊抗兔igg-gnps-dna和羊抗小鼠igg-gnps-dna两种gnps探针,用紫外扫描光谱和透射电镜(tem)对其表征,确定抗体和dna修饰在gnps表面。基于这两种gnps探针,分别建立了检测pcb12、pcb37、pcb77和aroclor1248的基于rt-ipcr的间接bca方法。该方法将包被原包被在戊二醛预处理过的pcr管上,让其和样品中的目标分子竞争抗体,与包被原结合的抗体保留在pcr管内,然后通过抗体与gnps探针表面的二抗结合,使得部分gnps探针附着在pcr管内,其他gnps探针则通过洗涤去除,在实时荧光定量pcr扩增阶段,条形码dna从gnps探针表面释放到pcr管内,并作为模板dna直接参与pcr扩增,通过测定条形码dna的量来间接检测样品中pcbs的含量。优化了退火温度,引物浓度,抗原抗体浓度,封闭液,gnps探针浓度,抗体与gnps探针反应时间等实验条件;在最佳实验条件下,基于羊抗兔igg-gnps-dna探针和抗pcb12、抗pcb37、抗pcb77、抗aroclor1248四种多克隆抗体,分别建立了检测pcb12、pcb37、pcb77、aroclor1248的标准曲线,其检测下限分别为2.63pgl-1,4.35pgl-1,1.72pgl-1,10.20pgl-1。基于羊抗小鼠igg-gnps-dna探针和抗pcb37单克隆抗体,该方法检测pcb37的lod为2.03pgl-1。将建立的方法用于小黄鱼样品中pcbs的分析检测,加标样品的回收率均在81%-112%之间,cv均小于15%。(5)分别用不同的抗体和dna修饰15nm的gnps,制备了五种gnps探针,抗pcb12抗体-gnps-dna,抗pcb37多抗-gnps-dna,抗pcb37单抗-gnps-dna,抗pcb77抗体-gnps-dna和抗aroclor1248抗体-gnps-dna,分别用紫外扫描光谱和tem对其表征,确保抗体和dna修饰在gnps表面;基于这五种gnps探针,分别建立了检测pcb12、pcb37、pcb77和aroclor1248的基于rt-ipcr的直接竞争bca方法。该方法将包被原包被在戊二醛预处理过的pcr管上,让其和样品中的目标分子竞争gnps探针上的抗体,一部分gnps通过包被原与抗体的特异性结合附着在pcr管内,其他gnps探针则通过洗涤去除,在实时荧光定量pcr扩增阶段,条形码dna从gnps探针表面释放pcr管内,并作为模板dna直接参与pcr扩增,通过测定条形码dna的量来间接检测样品中pcbs的含量。优化了金纳米探针浓度,封闭液,抗原抗体反应时间,有机溶剂浓度,反应介质中盐离子强度,ph值等条件,并在最佳实验条件下,分别建立了检测不同目标分子的标准曲线。该方法检测pcb12、pcb77、aroclor1248的检测下限分别为4.36pgl-1,9.12pgl-1,2.55pgl-1;基于多克隆抗体和单克隆抗体,该方法检测pcb37的检测下限分别为4.64pgl-1,3.15pgl-1;将建立的方法用于带鱼样品中pcbs的分析检测,加标样品回收率均在81-110%之间,cv均小于15%。总之,本文建立了ic-elisa、ba-elisa、基于rt-ipcr的间接竞争bca和基于rt-ipcr的直接竞争bca四种免疫分析方法来检测环境样品中的pcbs,这四种方法操作简便,快速,稳定性好,灵敏度高,样品检测结果与gc-ecd具有较好的相关性,能够用于实际环境样品中pcbs的快速高通量分析检测,具有较好的实际应用前景。