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烯丙孕素是一种人工合成的孕激素,在临床上广泛应用于母猪与母马的同步发情。烯丙孕素在动物机体内达峰时间较短,吸收比较快,生物利用度高;但烯丙孕素毒性较低,在动物的可食性组织中残留较少。本试验通过对国产烯丙孕素口服液与进口同类药的药动学比较研究,得到相对生物利用度等主要药动学参数。本研究不但对药物处方挑选、制剂工艺评价有着指导意义,并且通过相关药动学参数对预测烯丙孕素在食品动物的休药期与临床合理用药也具备重要参考价值。1.建立血浆中烯丙孕素含量的UPLC-MS/MS测定方法血浆中烯丙孕素以液液萃取法提取,采用Inertsil C4(3.0×150 mm,5Pm)色谱柱和梯度洗脱,三重四级杆质谱仪的多重反应监测(MRM)模式定量分析,采用内标法定量。流动相A:5mM甲酸铵水溶液,流动相B:乙腈,流速:0.4ml/min,进样量:10YL。本研究建立的烯丙孕素检测方法在1 ng/mL～100ng/mL的浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999 2。烯丙孕素在低、中、高三个浓度(1ng/mL、50ng/mL、100ng/mL)空白血浆添加样品的批间回收率分别为93.1%±3.98%、92.7%±5.75%、88.9%±3.69%,日内变异系数分别为3.50%～14.35%、3.43%～6.20%和2.88%%～4.15%,日间变异系数在5.11%～8.86%之间。本方法的检测限(LOD)为0.5ng/mL,定量限(LOQ)为1ng/mL。基质效应对烯丙孕素的含量测定有增强作用,烯丙孕素在低浓度(1ng/mL)为114.65%,中浓度(50 ng/mL)为109.23%,高浓度(100 ng/mL)为113.59%。将处理后的待测样品放在样品室(4℃)8h的时间内,低、中、高三个浓度添加水平的变异系数均小于11%,表明烯丙孕素在样品室测定时间内有较高的稳定性。将待测样品循环冻融3次后,低、中、高三个浓度添加水平的变异系数均小于9%,表明经过3个循环冻融后,血浆样品中烯丙孕素仍具有较高的稳定性。本方法适用于准确检测猪血浆中烯丙孕素的含量。2.两种烯丙孕素口服液在母猪体内药动学比较研究采用交叉实验设计,将8只体重接近的后备母猪随机分成两组,每组4只。第一阶段:第一组4只猪单剂量经口灌服国产烯丙孕素口服液受试品,第二组4只猪经口灌服烯丙孕素口服液参比品;第二阶段:第一组4只猪经口灌服烯丙孕素口服液参比品,第二组4只猪单剂量经口灌服烯丙孕素口服液受试品。两阶段洗脱时间为1周。给药前禁食12小时并采集一次空白血样,给药后按预定时间点采集血样适量。猪血浆中烯丙孕素含量采用上述经验证的UPLC-MS/MS检测方法测定。实测血药浓度-时间数据采用Winnonlin5.2药动学分析软件拟合药代动力学参数。猪单剂量口服烯丙孕素口服液受试品和参比品后,平均消除半衰期(t1/2)分别为6.44 h和6.43 h,达峰时间(Tmax)分别为0.84 h和1.09 h,达峰浓度(Cmax)分别为 55.41 ng/mL 和 57.39 ng/mL,清除率(Cl)分别为 2781.02 mL/h/kg 和 3727.67 mL/h/kg,表观分布容积(Vd)分别为24924.69 mL/kg和36418.91 mL/kg,平均滞留时间(MRT0～t)分别为6.36 h和6.79 h,平均药时曲线下面积(AUC0～t)分别为424.37 h*ng/mL和311.68 h*ng/mL。结果表明,烯丙孕素口服液灌服给药后在猪体内吸收和消除均迅速。以烯丙孕素参比品作对照,国产烯丙孕素受试品的相对生物利用度为136.29%,吸收程度好于进口的同类产品。受试品组和参比品组的主要药动学参数:t1/2、Tmax、Cmax、AUC0～t、AUC0～∝、和MRT0～t间均无显著的统计学差异(P>0.05),表明烯丙孕素口服液受试品与进口同类产品间有相似的药动学特征。