玫瑰茄花色苷提取与分离纯化及特性研究

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玫瑰茄具有很高的药用价值和食用价值,例如可以利用玫瑰茄花萼制作蜜饯、花茶等;玫瑰茄花色苷具有抗氧化、预防糖尿病和抗炎症等对人体有益的生理功效。玫瑰茄生长在亚热带地区,花期长,产量高,在食品和医药行业备受关注。玫瑰茄花色苷易受环境因素影响发生降解,因此本文主要探究玫瑰茄花色苷的工艺和特性,为大力开发玫瑰茄花色苷提供实验基础。(1)以玫瑰茄花色苷提取量为评价指标,响应面法优化超声微波提取玫瑰茄花色苷工艺参数。最优工艺参数条件:超声功率350 W,提取温度50℃,微波功率279W,提取时间18 min,乙醇体积分数60%,液料比36:1(mL/g)。利用pH示差法计算玫瑰茄花色苷提取量为787.56 mg/100g。(2)选择AB-8、D101、NKA-II和HPD-100四种大孔树脂,以静态吸附率和解吸率两个评价指标筛选出对玫瑰茄花色苷纯化效果最佳的大孔树脂。由静态纯化实验可知,AB-8大孔树脂对玫瑰茄花色苷的静态吸附率为88.58%,静态解吸率为90.37%,实验结果表明,AB-8大孔树脂纯化效果优于其他三种树脂,因此,选择AB-8大孔树脂进行后续的动态纯化实验。在动态吸附和解吸实验的基础上,通过单因素实验和响应面优化设计实验,确定了玫瑰茄花色苷最佳动态吸附条件:上样液pH2.5,上样浓度3.0 mg/mL,上样流速2.0 mL/min,并在此条件下进行三组平行实验,得到的玫瑰茄花色苷动态吸附率为99.2%;最佳解吸条件:洗脱液pH 2.0,洗脱液浓度80%,洗脱流速为4.0 mL/min,以同样的条件设计三组平行实验,得到玫瑰茄花色苷解吸率为92.15%。花色苷的色价由原来的2.35提高到30.2。(3)选用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶对AB-8大孔树脂纯化后的玫瑰茄花色苷进一步分离纯化。考察上样浓度、洗脱液浓度和洗脱流速对玫瑰茄花色苷分离纯化效果的影响,通过测定收集组分的紫外吸光度值,确定了分离纯化的最佳工艺条件:上样浓度20 mg/mL,洗脱液浓度50%甲醇(pH 3),洗脱流速0.3 mL/min,在此条件下,玫瑰茄花色苷分离效果最好,收集到一个组分峰。通过HPLC-MS和质谱信息对纯化后玫瑰茄花色苷组分进行初步鉴定。结果表明玫瑰茄花色苷一个组分峰中有2种花色苷成分,分别为飞燕草素-3-桑布双糖苷和矢车菊素-3-桑布双糖苷。(4)以玫瑰茄花色苷溶液的吸光度和L*、a*、b*值为指标,评价玫瑰茄花色苷的稳定性。实验结果表明,玫瑰茄花色苷在4℃低温条件下能很好的保存,并且能保持花色苷本身红色的颜色特征。pH对玫瑰茄花色苷的稳定性影响很大,在酸性条件下,玫瑰茄花色苷稳定性很好,且颜色保持红色不变;在碱性条件下,花色苷稳定性较差,且改变了玫瑰茄花色苷原始的颜色特征。Na+、K+、Mg2+和Ca2+四种离子,对玫瑰茄花色苷有一定的辅色作用;Fe2+、Cu2+和Al3+三种离子对玫瑰茄花色苷稳定性有一定的破坏作用,所以在实际应用时,避免与其接触。(5)采用DPPH法、·OH清除能力和总还原能力3种方法测定玫瑰茄花色苷的抗氧化活性。实验结果表明,在一定的范围内,纯化物花色苷与Vc对DPPH自由基的清除能力相当,但两者对DPPH自由基的清除能力明显高于提取物花色苷;在高浓度条件下,玫瑰茄花色苷能有效的清除·OH自由基,但弱于Vc清除能力;玫瑰茄花色苷具有一定的总还原能力,总还原能力顺序依次为Vc>纯化物花色苷>提取物花色苷。
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