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[目的]构建MRP1特异性发夹状RNA重组腺病毒载体并研究其对耐三氧化二砷(ATO)的白血病K562/AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用。[方法]构建MRP1特异性发夹状RNA重组腺病毒,并感染K562/AS2细胞;用荧光实时定量PCR分析MRP1mRNA的表达水平;流式细胞仪检测MRP1蛋白表达;MTT的方法检测三氧化二砷及依托泊苷的细胞毒作用。[结果]第一部分:将重组质粒pGenesil.1-MRP1-shRNA进行PCR扩增,插入入门载体pDONR,并进行同源重组,挑选阳性克隆进行正向和反向测序。将测序正确的阳性pDONR-MRP1-shRNA穿梭质粒和腺病毒骨架质粒pAd/BLOCK-iTTM-DEST按说明书进行同源重组,并进行筛选。将选择得到的菌株扩增培养,琼脂糖电泳DNA回收试剂盒提纯质粒,得到可以表达shRNA-MRP1的重组腺病毒质粒pAd-shRNA-MRP1。最后进行鉴定和滴度测定,感染293A细胞4-7天后可以观察到培养瓶里有明显的绿色荧光蛋白表达,说明有感染能力的重组腺病毒包装成功。第二部分:用重组腺病毒pAd-MRP1-shRNA感染K562/AS2细胞,感染前后K562/AS2中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为(34.70±0.28 vs 4.19±0.03,P<0.05)和(26.40±0.16 vs 10.85±0.37, P<0.05)。K562/AS2细胞对三氧化二砷及依托泊苷耐药倍数分别为(11.4078±0.3183 vs 1.6126±0.3015,P<0.05),和(5.9141±0.0149 vs 1.7664±0.1038,P<0.05),逆转倍数分别为(7.2409±1.3668)和(3.3555±0.1886).[结论]成功构建了pAd-EGFP-U6-shRNA-MRP1重组腺病毒载体,该载体感染K562/SA2细胞后可以抑制细胞MRP1基因表达以及逆转其对ATO和依托泊苷的耐药。