酵母β-D-葡聚糖改性及对玉米赤霉烯酮吸附效果的研究

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本试验以酵母细胞壁为材料,提取酵母β-D-葡聚糖,然后对其进行硫酸酯化改性,以硫酸基取代度为试验指标,正交试验优化不同取代度产物的条件。探讨酵母β-D-葡聚糖改性前后的产物对ZEA的体外、体内吸附试验。本研究共进行了2个试验。   试验一:以酵母细胞壁为原料,利用酶碱法提取酵母细胞壁中的酵母多糖,对提取物进行了定性定量分析。薄层层析和红外光谱表明提取物主要成分为β-D-葡聚糖。制备的酵母提取物为白色粉末,无味,不溶于水。苯酚-硫酸法测定其多糖含量为87.36%,蛋白质含量为3.23%,多糖得率为20.14%。   试验二:以试验一提取的酵母β-D-葡聚糖为原料,利用氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化改性。以取代度(DS)为试验指标,通过单因素试验和正交试验得到不同取代度的酵母β-D-葡聚糖硫酸酯,体外吸附ZEA,结果表明,当取代度为0.49时,对应这一取代度的酵母β-D-葡聚糖硫酸酯对ZEA吸附量最大,为18.6528μg/mg,高于酵母β-D-葡聚糖的吸附量2.2707μg/mg。此取代度对应的酯化条件为:反应温度45℃,反应时间2h,氯磺酸与吡啶的体积比1:6。红外光谱分析表明:酵母β-D-葡聚糖硫酸酯的红外光谱图在1259.56cm-1和808.12cm-1处出现较强的特征吸收峰,分别对应S=O拉伸振动和C-O-S变角振动,说明已成功引入硫酸根基团。通过扫描电镜观察,酵母β-D-葡聚糖硫酸酯颗粒表面结构变成网格装,比表面积增大。   以20g左右的健康雌性昆明小鼠为试验动物,共30只,酵母细胞壁、酵母β-D-葡聚糖及酵母β-D-葡聚糖硫酸酯为吸附剂,采用单次灌胃方式,将其与玉米赤霉烯酮同时灌胃,评价酵母β-D-葡聚糖及其酯化物对小鼠玉米赤霉烯酮毒性损伤的保护能力。试验共分为5个处理组,每组6只,分别为空白对照A组;单独灌服40mg/kg bw(8% LD50)ZEA的B组,同时灌服ZEA和吸附剂(酵母细胞壁、酵母β-D-葡聚糖、酵母β-D-葡聚糖硫酸酯)的C、D、E组。灌胃48h后收集血液测定血清学指标。结果显示,和A相比,B组的AST和BUN水平显著升高,TP水平显著降低(p<0.05);和B组相比,C、D、E组的AST、ALT、ALP、TBIL水平降低,TP、ALB和CRE水平升高,但各组之间差异不显著(p>0.05);C、D、E组之间各指标差异不显著(p>0.05)。这一结果说明单次灌服ZEA,小鼠肝脏受到一定程度的损伤,β-D-葡聚糖及其酯化制剂可以吸附部分的ZEA,在一定程度上缓解小鼠的肝脏损伤。但改善效果不明显,原因是因为吸附剂的添加量过低。
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