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禽流感(Avian influenza virus)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种高度接触性传染病，几乎所有的野生及家养禽类都可感染，该病经常给养禽业造成严重的经济损失。安全有效的抗AIV疫苗一直是AIV研究的重点。活载体疫苗可同时诱导体液免疫反应和细胞免疫反应，有利于抵抗变异性强的病毒。鸭瘟病毒(DPV)作为一种疱疹病毒，拥有庞大的基因组和许多非必需区，具有用作表达外源基因的病毒活载体的巨大潜力，被认为是理想的活疫苗载体。
本研究从感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的鸭瘟病毒(DPV)疫苗毒株中提取了总DNA，并以此为模板，利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的TK基因（约2.5kb），将其克隆入pUC19载体获得载体puDTK。根据已知载体pcDNA-LacZ的序列设计了一对引物，PCR扩增出pcDNA-LacZ上含CMV启动子、多克隆位点、SV40及LacZ的完整的基因表达盒插入puDTK的TK上，获得质粒puDTCL。根据Genbank已发表的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素(HA）基因序列，设计一对特异性引物，利用RT-PCR技术扩增A/chicken/Shandong/wf415/2007株H5N1亚型的禽流感病毒的HA基因，把HA基因作为目的片段克隆到puDTCL的表达盒的多克隆位点NheⅠ与ApaⅠ之间，成功构建含LacZ及HA基因的转移栽体质粒puDTCL-HA。将这载体质粒与DPV34F2疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)，经蓝斑克隆筛选和纯化，纯化病毒经PCR鉴定和Western-blot分析，结果表明:获得了表达HA基因的重组鸭瘟病毒(rDPV-HA)。
本研究初步获得了一株能同时表达禽流感HA的重组鸭瘟病毒rDPV-HA，同时，构建的转移栽体puDTCL为开发鸭瘟病毒二价基因工程疫苗提供了条件。为研制抗AIV的重组鸭瘟病毒活载体疫苗奠定了基础。重组的DPV疫苗在将来进一步的研究中可作为新型AIV基因工程疫苗代替禽流感传统的全病毒灭活苗，为禽流感的防治带来新的技术。