脂肪组织是动物体内维持能量代谢平衡的核心器官。脂肪在家畜动物体内过度积累会降低胴体品质。脂肪细胞的分化是由间充质干细胞向成熟脂肪细胞分化的过程,在该过程中受到多种酶、激素、转录因子、miRNA和其它信号通路的调控。脂肪细胞的分化和脂质积累对脂肪组织体积的增大具有决定性作用,直接影响家畜动物的胴体脂肪含量。因此,探寻脂肪细胞分化的分子调控机制对减少绵羊不必要的脂肪沉积具有指导意义。前期研究表明FITM2蛋白定位于内质网,参与脂肪组织磷脂代谢,改变脂滴和内质网的磷脂分布,可促进脂滴中脂质的积累。在猪肌内前体脂肪细胞中发现FITM2可促进前体脂肪细胞的分化。在小鼠中敲除FITM2后,小鼠脂肪代谢功能出现障碍。目前已知的关于FITM2的研究多集中在小鼠和猪等物种,该基因对绵羊脂肪代谢的调控功能和机制尚不明确。本研究以广灵大尾羊尾部、皮下、肾周脂肪、背最长肌组织和从尾脂中分离的前体脂肪细胞为研究对象。通过克隆和生物信息学软件分析广灵大尾羊FITM2基因。分离广灵大尾羊尾部前体脂肪细胞,培养并诱导分化。构建慢病毒介导的FITM2基因过表达和干扰载体。用q PCR和油红O染色等方法,探究FITM2对绵羊前体脂肪细胞分化的调控作用。构建不同长度的FITM2启动子缺失片段荧光素酶报告载体,分析转录调控的核心区域。构建慢病毒介导的STAT5A基因过表达和干扰载体。用双荧光素酶、q PCR和油红O染色等方法,探究转录因子STAT5A对FITM2的调控机制,明确在绵羊前体脂肪细胞分化中的作用。用生物信息学软件预测靶向FITM2-3’UTR的miRNA,发现miR-31是FITM2基因的潜在靶向miRNA。通过双荧光素酶报告系统、q PCR和油红O染色等方法,验证两者的靶标关系,探究miR-31对FITM2的转录后调控作用,明确miR-31对绵羊前体脂肪细胞分化的作用和机制。主要研究结果如下:1.FITM2基因的生物信息学分析FITM2基因编码区全长852 bp,编码283个氨基酸,定位于内质网,有6个跨膜域和26个潜在磷酸化位点,是不稳定疏水蛋白,在哺乳动物间高度保守。2.FITM2基因促进绵羊前体脂肪细胞的分化FITM2在尾部和皮下脂肪组织中的表达量显著高于肾周脂肪和背最长肌组织（P＜0.05）。在前体脂肪细胞中过表达FITM2后,成脂标志基因PPARγ和C/EBPα的表达量显著升高（P＜0.05）,FABP4的表达量极显著升高（P＜0.01）,Adipo Q表达量有升高趋势但不显著。干扰FITM2的表达后,成脂标志基因均极显著降低（P＜0.01）。且在前体脂肪细胞分化过程中FITM2 m RNA表达量呈上升趋势,表明FITM2能够调节成脂标志基因的表达,促进成脂分化和脂滴积累。3.转录因子STAT5A通过正调控FITM2的表达促进绵羊前体脂肪细胞分化在广灵大尾羊FITM2启动子-453 bp～+17 bp区域存在调控FITM2活性的转录因子STAT5A。在前体脂肪细胞中过表达STAT5A基因后,FITM2和成脂标志基因m RNA表达量均极显著升高（P＜0.01）。干扰STAT5A基因的表达后,FITM2和成脂标志基因m RNA表达量均极显著下降（P＜0.01）。表明广灵大尾羊FITM2受到STAT5A的正调控,在细胞成脂过程中促进前体脂肪细胞的分化和脂滴的形成。4.miR-31靶向FITM2抑制绵羊前体脂肪细胞分化在前体脂肪细胞中过表达miR-31后,成脂标志基因PPARγ和FITM2的表达量显著降低（P＜0.05）,C/EBPα、FABP4和Adipo Q的表达量均极显著降低（P＜0.01）。抑制miR-31后,成脂标志基因PPARγ和Adipo Q的表达水平均显著升高（P＜0.05）,C/EBPα、FABP4和FITM2表达水平均极显著升高（P＜0.01）。表明miR-31靶向FITM2-3’UTR的2644 bp-2650 bp区域,抑制FITM2的表达,从而抑制前体脂肪细胞的分化能力。综上所述,FITM2正调控绵羊前体脂肪细胞的分化,在转录水平受STAT5A的正调控,在转录后水平受miR-31的负调控。本研究为进一步探究FITM2在脂肪代谢中的调控作用提供了理论依据,为绵羊分子遗传改良奠定了科学基础。