奥奈达希瓦氏菌MR-1是一种用于了解胞外电子传递（EET）的平台微生物,具有完整的基因组序列和注释基因组。与大肠杆菌等其他模式菌株相比,现有的可用的质粒组件（如启动子和复制子）还不足以方便、快速地对奥奈达希瓦氏菌MR-1的多个基因的表达进行精细调控。在此,我们构建并表征了一个质粒工具盒,该工具盒包含一组表达载体,由启动子、复制子、抗性基因和RK2转移起始位点组件（oriT）组合而成,其中每个部分都可以很容易地被固定的限制性内切酶位点替换。表达盒的部分也符合Bio Brick合成生物学标准。我们以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因,对启动子的强度进行了测定和定量。采用实时荧光定量PCR法测定了不同复制子的拷贝数。我们进一步将两个具有不同抗性基因的相容质粒转入到重组奥奈达希瓦氏菌MR-1中,从而调控了两个不同荧光蛋白的表达。该质粒工具盒进一步用于在敲除mtr A基因的奥奈达希瓦氏MR-1菌株中过表达Mtr CAB孔蛋白-c型细胞色素复合物。三氧化钨（WO₃）还原试验和微生物燃料电池（MFC）试验结果表明,当Mtr CAB在中等水平表达时,EET效率提高最为显著,从而证明了该质粒工具盒在奥奈达希瓦氏菌中调控EET所起的作用。本研究开发的质粒工具盒可快速、方便地对基因表达进行微调,并可提高对奥奈达希瓦氏菌MR-1的基因操作能力。