【摘 要】
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【背景】神经内分泌肿瘤（NENs）是一类起源于神经内分泌细胞的肿瘤。神经内分泌细胞具有神经内分泌的表型,可以分布在全身的任何部位。近40年来,神经内分泌肿瘤的发病率上升了6-7倍,越来越引起人们的重视。胃肠胰神经内分泌肿瘤（GEP-NENs）患病率占所有NENs的60%-70%,成为消化系统仅次于结直肠癌的第二常见肿瘤。长链非编码RNA（lnc RNA）是一类转录长度超过200nt的非编码RNA分
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【背景】神经内分泌肿瘤（NENs）是一类起源于神经内分泌细胞的肿瘤。神经内分泌细胞具有神经内分泌的表型,可以分布在全身的任何部位。近40年来,神经内分泌肿瘤的发病率上升了6-7倍,越来越引起人们的重视。胃肠胰神经内分泌肿瘤（GEP-NENs）患病率占所有NENs的60%-70%,成为消化系统仅次于结直肠癌的第二常见肿瘤。长链非编码RNA（lnc RNA）是一类转录长度超过200nt的非编码RNA分子,在真核细胞内普遍转录,被证实参与了许多疾病的发生及进展。【目的】研究lnc RNA HNF1A-AS1在GEP-NENs中的表达和对GEP-NENs增殖、迁移和侵袭的影响及其机制,拟为临床寻找诊断GEP-NENs的生物标志物以及有效治疗靶点提供理论依据。【方法】运用人类基因转录组测序（genechip）和实时定量PCR技术检测HNF1A-AS1在胃神经内分泌肿瘤（g-nens）与正常胃组织以及胰腺神经内分泌肿瘤细胞（QGP-1）、小肠神经内分泌肿瘤细胞（STC-1）与正常人胰腺导管上皮细胞（h TERT-HPNE）之间的表达差异。利用si-RNA构建低表达和质粒构建高表达的GEP-NENs细胞系,通过cck8实验、平板克隆实验、划痕实验、transwell研究GEP-NENs细胞增值、迁移、侵袭的情况;western blot实验研究与GEP-NENs细胞增值、迁移、侵袭相关的蛋白的表达变化。利用质粒构建QGP-1细胞HNF1A-AS1高表达体系以及阴性对照组并注射至小鼠体内,以研究HNF1A-AS1对GEP-NENs成瘤的影响。通过生信分析找到可能参与调控HNF1A-AS1的的转录因子以及它们之间的结合区域,q RT-PCR验证转录因子调控了HNF1A-AS1的转录。基因芯片与q RT-PCR相结合找到HNF1A-AS1抑制GEP-NENs细胞侵袭转移的作用靶点并通过Transwell验证。Transwell和western blot验证敲降HNF1A-AS1促进GEP-NENs细胞侵袭转移通过TGFβ通路发生作用。【结果】HNF1A-AS1在g-NENs组织中的表达低于瘤旁组织,QGP-1、STC-1中HNF1A-AS1的表达低于h TERT-HPNE。HNF1A-AS1亚细胞定位主要在QGP-1、STC-1细胞核内。平板克隆实验表明过表达HNF1A-AS1减少了GEP-NENs细胞克隆的数量,而敲降HNF1A-AS1则增加了细胞克隆的数量。成瘤实验中,过表达HNF1A-AS1的肿瘤相较于阴性对照组肿瘤体积偏小,重量偏轻。在TFbind和RNAreg中预测HNF1A-AS1的上游基因并取交集并使用JASPAR预测启动子区域与转录因子结合位点,转录因子3（TCF3）得分最高。q RT-PCR检测发现GEP-NENs细胞中TCF3水平明显低于正常人胰腺导管上皮细胞,敲降TCF3可以下调HNF1A-AS1水平并促进细胞的迁移和侵袭。过表达HNF1A-AS1抑制细胞的迁移、侵袭,敲降HNF1A-AS1后结果与之相反。Wb发现g-NENs组织中EMT标志物中上皮标志物下调,间质标志物上调;在GEP-NENs细胞中,过表达HNF1A-AS1导致上皮标志物下调,间质标志物上调,敲降HNF1A-AS1则相反。根据人类基因组测序差异性以及q RT-PCR发现OSM介导HNF1A-AS1抑制侵袭;Transwell验证TGF-β通路被阻断时可以逆转因HNF1A-AS1敲除而引起的细胞侵袭转移。【结论】在g-NENs组织、P-NENs细胞、SI-NENs细胞中HNF1A-AS1相较于瘤旁正常组织及正常细胞呈低表达。HNF1A-AS1通过EMT机制抑制GEP-NENs细胞增殖、转移及侵袭。TCF3调控HNF1A-AS1通过TGFβ/OSM信号通路抑制GEP-NENs细胞增殖、转移及侵袭。因此HNF1A-AS1有望为GEP-NENs的诊断和治疗提供新的靶点。
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