猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)属革兰氏阳性兼性厌氧球菌,有溶血性,是重要的人兽共患病病原,呈世界性分布。该病原主要通过呼吸道及粘膜途径感染人畜,能引起败血症、关节炎、心内膜炎及脑膜炎等多种病症,病死率高,对养猪生产、食品安全及公共卫生构成巨大的威胁。猪链球菌有35种血清型,其中2型猪链球菌(Streptococcus suis type2,SS2)致病力最强,是临床病例中经常分离到的血清型。目前,已发现SS2具有多种毒力因子,但其功能和致病机理至今尚未完全明确。本研究比较了SS2分离株的体内外致病力差异,筛选并优化了SS2的冻干保护剂组合。　　 比较了5个SS2分离株对Hep-2和Vero细胞的细胞毒性和黏附侵袭力的差异,研究了溶血素对Hep-2细胞毒性作用以及不同初始菌量SS2(104至107CFU)和不同孵育时间(30min、60min、120min)条件下的黏附特征。结果表明,5个SS2分离株高浓度接种时对Hep-2的细胞毒性无显著差异,但分离株HN137对Vero细胞的毒性要显著低于其他4株;在低浓度接种条件下,分离株ZJXS033对两种细胞的毒性高于其它菌株。此外,本试验证明了溶血素是引起Hep-2细胞溶解的主要毒力因子。随着孵育时间的增加,黏附率提高:孵育时间一定时,随着加入细菌浓度的升高,黏附的细菌数随之增加,但在高接种剂量的条件下黏附率偏低。本试验所用SS2分离株对Hep-2细胞的黏附率均较低,分离株HZ0604最高为0.32％,分离株ZJXS033最低为0.08％。　　 以野生斑马鱼作为模式动物,对6株mrp+epf+sly+猪链球菌2型(SS2)分离株进行致病性比较。斑马鱼经腹腔接种不同稀释度的SS2分离株,连续观察5天,Kaplan-Meier生存曲线分析并统计半数致死量。结果显示,6个分离株对斑马鱼的LD50均在105-10+CFU之间,分离株间的毒力差异不显著。从攻毒后死亡的鱼腹腔和脑可分离到SS2,并观察到鱼腹腔出血及肝、肠、脑部炎性病变。　　 选取SS2分离株HN137比较了4种冻干保护剂——葡萄糖、蔗糖、丙三醇和脱脂乳粉的单因素保护效果,其保护率分别为6.17％,10.29％,13.55％和15.89％。优选出丙三醇和脱脂乳粉进行响应面分析试验,优化的冻干保护剂配方为:脱脂乳粉8％、甘油5％,预测即时存活率达45％左右。加速储存试验对分离株HN137同批冻干样品在不同温度(25、30、35、40、45℃)条件下存放,分离株HN137同批冻干样品在不同温度(25、30、35、40、45℃)条件下存放,分别采样并测定活菌数,建立了Arrhenius储存稳定性方程,由方程外推得到4℃下的降解速率常数为0.001,损失108CFU细菌的预测时间为2.1年。　　 本试验结果为深入研究SS2的致病机制、探索菌种保存和冻干弱毒菌苗的制备提供了一定基础。