啤酒酵母中RNA、β-(1,3)-D-葡聚糖和蛋白质的提取及应用研究

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啤酒酵母营养丰富,蛋白质48.8%,赖氨酸含量较高;β-(1,3)-D-葡聚糖29%,是生物多糖中最具抗癌活性的多糖物质;RNA 2.67~10.0%,在医药、食品化妆品以及农业等行业中具有重要的用途。我国是世界第一大啤酒生产国,年产干燥废啤酒酵母10万多吨。利用啤酒废酵母生产有用物质,既能减少环境污染,又能实现废物的增值增效,延长拓宽产业链条。本文以啤酒酵母为原料,研究了RNA、β-(1,3)-D-葡聚糖和蛋白质的分离、提取方法,主要研究结果如下:1以啤酒酵母粉为试验原料,稀碱法提取RNA,最佳提取条件为:NaOH浓度0.4%、温度100℃、时间1h、碱料比15mL:1g、醇料比10mL:1g;RNA提取率为5.25%,RNA含量为83.8%。2对比不同的β-(1,3)-D-葡聚糖提取方法,确定碱-酶法提取啤酒酵母粉中的β-(1,3)-D-葡聚糖。最佳提取条件为:NaOH浓度3%、温度80℃、时间2h、碱料比15mL:1g、碱性蛋白酶600U/g;β-(1,3)-D-葡聚糖提取率13.8%、含量85.2%,粘均分子量为192KD;薄板层析显示,提取物水解后只含有葡萄糖;红外光谱分析证明,提取物是纯度较高的β-(1,3)-D-葡聚糖。3分步法提取蛋白质,第一步,RNA提取后离心上清液中pH4.2~4.5沉淀蛋白质,第二步,β-(1,3)-D-葡聚糖提取后离心上清液中pH3.8~4.1沉淀蛋白质。蛋白质提取率13.2%、粗蛋白含量79.1%。氨基酸全分析显示,八种必需氨基酸的含量及组成与FAO标准非常一致。4通过单因素和正交试验,影响β-(1,3)-D-葡聚糖水解的各因素顺序依次为:预水解硫酸浓度>水解温度>水解硫酸浓度>水解时间。水解参数为:预水解硫酸浓度12 mol/L、水解硫酸浓度2 mol/L、水解温度100℃、水解时间24h。5试验结果表明:经口给予小鼠酵母β-(1,3)-D-葡聚糖30天后,能提高小鼠足跖肿胀度、抗体生成细胞数,对巨噬细胞吞噬指数无影响。提示β-(1,3)-D-葡聚糖具有增强细胞免疫功能、体液免疫功能的作用,对巨噬细胞吞噬功能无影响。对体重无影响。
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