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第一部分 慢性肉芽肿病记忆B细胞数量变化及相关机制目的:分析慢性肉芽肿病（chronic granulomatous disease,CGD）患者外周血记忆B细胞（Bm）数量,并探讨其变化的可能机制。方法:流式细胞术检测15例CGD患者及15例健康同龄对照外周血中Bm、生发中心依赖性Bm（GC-inBm）、浆细胞（PC）、初始B细胞（Na?ve B）的百分比、辅助性T细胞（Th）、滤泡辅助性T细胞（Tfh）的百分比以及Tfh细胞表面ICOS、PD-1分子的表达量。流式细胞术检测CGD患者及健康同龄对照Bm表面CD40分子,以及Tfh表面CD40L在不同刺激时间的百分比。结果:CGD患者Bm比例（1.21%±0.91%）较对照组（2.79%±0.85%）明显降低,（P<0.0001）;Na?ve B比例CGD组（79.63%±12.68%）较对照组（59.06%±13.57%）明显升高（P=0.0002）;PC比例CGD组（1.45%±1.56%）较对照组（3.67%±2.11%）明显降低（P=0.0029）。Tfh比例CGD患者（2.84%±1.9%）较对照组（4.58%±1.86%）明显降低（P=0.0169）;Th比例、Tfh表面ICOS及PD-1分子比例无明显差异。B细胞表面CD40无明显差异。未刺激时CGD患者Tfh细胞表面CD40L比例（1.97%±0.82%）较对照组（4.96%±1.39%）明显降低,（P=0.0011）;刺激4h后,CGD患者Tfh细胞表面CD40L比例（18.32%±11.72%）较对照组（36.93%±15.34%）依旧明显降低（P=0.0399）;而刺激6h后,两组间差异不明显。结论:CGD患者Na?ve B向Bm及PC分化的过程存在一定缺陷,使得患者外周血中Na?ve B增多而Bm及PC减少,这可能是导致患者反复感染的原因之一。而Na?ve B的分化过程缺陷可能与CGD患者Tfh细胞数量及其表面的CD40L表达的减少相关。第二部分 1例女性X染色体连锁慢性肉芽肿病目的:报道1例罕见女性X连锁慢性肉肿病患儿的临床及蛋白表达特征、产前产后CYBB基因分析结果,丰富对该病的认识,并对该病的产前诊断予以警示。方法:收集临床资料。一代测序检测胎儿羊水脱落细胞、患儿及其父母外周血细胞CYBB基因。流式细胞术检测患儿及父母外周血中性粒细胞呼吸爆发功能。流式细胞术检测患儿及父母外周血中性粒细胞gp91phox蛋白表达。X染色体失活检测患儿及父母X染色体失活情况。结果:临床资料:患儿,女,1岁11月,1月龄时接种卡介苗,2月龄时接种处开始形成溃疡,20天后形成卡疤。2月21天龄以肛周脓肿为首发症状,6月龄腋窝淋巴结化脓1次。现共患肺炎3次,右颈部淋巴结肿大1次。患儿两个双胞胎哥哥为均为CGD患者,母亲为携带者。CYBB基因分析:患儿20周胎龄时羊水脱落细胞DNA水平分析CYBB基因exon9,c.1123delG为杂合缺失突变。患儿生后外周血DNA水平该位点仍为杂合缺失突变,而cDNA水平为纯合缺失突变,致蛋白质编码发生p.Glu375Serfs X11改变;其母亲外周血DNA及cDNA水平,该位点均为杂合突变;父亲无突变。外周血中性粒细胞呼吸爆发试验:患儿刺激指数（Stimulation Index,SI）为0.65,患儿母亲刺激后呈双峰,SI为10.86,患儿父亲SI为134.93。gp91phox蛋白测定:患儿无表达,母亲部分表达,呈双峰,父亲完全表达。X染色体失活:患儿的父源X染色体失活率为99.5%;患儿母亲的X染色体失活率为76.1%。结论:由于女性携带者有出现正常的X染色体失活的可能性,所以在进行产前诊断时要对有XCGD家族史的女性胎儿CYBB基因的DNA及cDNA均应分析,且应对女性CYBB基因杂合突变胎儿行脐带血中性粒细胞呼吸爆发功能检查和gp91phox蛋白检测,以避免女性XL-CGD患儿出生。第三部分 慢性肉芽肿病的临床表现及分子特征目的:探讨114例慢性肉芽肿病患儿的临床表现,实验室检查,病原学及基因突变的特征。方法:收集2003年1月-2018年10月我课题组在重庆医科大学附属儿童医院收治的114例CGD患儿临床资料和实验室检查结果,进行分析总结。流式细胞术检测可疑患儿的中性粒细胞呼吸爆发功能,通过计算中性粒细胞刺激指数,辅助诊断患者。通过一代及二代测序,分析患者CGD相关基因。结果:基本情况:114例患儿中有109例为男性,5例为女性,来自109个家庭。62例患者来自西南部地区（54.4%）,49例的患者有家族史（42.9%）。发病年龄从生后2天到72个月不等,平均发病年龄是4个月,中位发病年龄为1月。诊断年龄为10天到172个月不等,平均诊断年龄为23月,中位诊断年龄为12月。共有33例患者死亡,平均死亡年龄为40月（6月-120月）,中位死亡年龄为31月。29例患者接受了骨髓移植治疗,其中2例死亡,1例失败。临床表现:114例患者都有反复发热（100%）,105例有肺炎（92.1%）,84例有脓肿（73.7%,包括皮肤,肛周,肝脾脓肿等）,67例有淋巴结炎（58.8%）,67例有肝脾肿大（58.8%）,67例患者有结核感染（58.8%）,54例有卡介苗接种后异常反应（55.1%）,52例有腹泻（45.6%）,48例有真菌感染（42.1%）,35例有败血症（30.7%）,19例有鹅口疮（16.7%）,8例有尿路感染（7.0%）,5例有骨髓炎（4.4%）。实验室检查:大多数患者的外周血白细胞和CRP水平高于正常范围。免疫球蛋白正常或增高,淋巴细胞分类未见明显变化趋势。NBT在0到6之间,平均值为1,中位数为0。113例患儿作了呼吸爆发试验,SI从0.1到15不等,平均为1.67,中位数为1.31,其中95例（84.1%）低于2。32例患者找到真菌感染证据,主要为白色念珠菌和曲霉菌。37例患者找到细菌感染证据,主要为肺炎克雷伯菌,金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,卡他莫拉菌等。基因突变分析及产前诊断:95例患者为CYBB基因突变,其中以剪切突变（30例,31.6%）最多,其次是缺失突变（27例,28.4%）、无义突变（18例,18.9%）及错义突变（18例,18.9%）。8例为CYBA,3例为NCF1,2例为NCF2基因突变。有6例在g DNA及cDNA中均暂未找到突变位点。找到了4个突变频率较高的位点,分别是CYBB:4例c.252G>A,3例c.676C>T,4例c.868C>T;CYBA:3例c.152T>A。产前羊水基因检测共筛查了15例胎儿,其中7例患者,5例健康儿童,3例携带者。结论:1岁以内出现严重肺炎,脓肿,淋巴结炎,结核感染,卡介苗播散及反复腹泻且不易治愈者,应怀疑CGD。本研究中绝大多数CGD患者中性粒细胞呼吸爆发SI小于2,主要的突变基因为CYBB基因,主要的突变类型为剪接突变。流式细胞术检测中性粒细胞呼吸爆发功能可快速辅助诊断CGD,基因检测可进一步确诊。