荜茇酰胺是一种从胡椒科植物中提取出来的天然生物碱类化合物,对结肠癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌等恶性肿瘤都具有显著的细胞毒性作用,而对正常细胞几乎无明显影响,是一种潜在的抗肿瘤药物。本课题采用白蛋白结合纳米粒技术(NabTM),制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒新型给药系统,以白蛋白作为药物载体,改善荜茇酰胺的水溶性,提高药物的体内生物利用度。通过单因素考察和星点设计实验对处方和制备工艺进行优化,筛选出最佳制备条件,并进行药剂学评价、药代动力学研究和体外抗肿瘤作用研究。建立荜茇酰胺的体外分析方法,以包封率为指标,分别对药质比、有机相种类、有机相与水相体积比、白蛋白浓度、p H、均质压力、均质次数、冻干保护剂含量等因素进行考察,最终确定最佳制备条件为:荜茇酰胺与白蛋白摩尔比为6:1,无水乙醇与二氯甲烷比例为3.5:1,有机相与水相体积比为1:8,白蛋白浓度为1.25%,p H为8,均质压力为80 psi,均质次数为9次,蔗糖浓度为2%。对荜茇酰胺白蛋白纳米粒进行药剂学评价,包括粒径、外观形态、载药量、包封率、物理状态、稳定性等方面。本实验制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的外观形态呈大小相对均一的圆球形,平均粒径在210 nm左右,载药量为2.1%,包封率为87.6%。在荜茇酰胺白蛋白纳米粒中,荜茇酰胺以无定型状态被包裹在白蛋白中。稳定性测试结果表明,荜茇酰胺白蛋白纳米粒在4℃保存的条件下,可以在4周内保持稳定。荜茇酰胺白蛋白纳米粒的体外释放行为具有缓释效果,24 h的累积释放量为67.24%。在此基础上我们对荜茇酰胺和荜茇酰胺白蛋白纳米粒的药代动力学性质进行评价。结果表明,在给予相同剂量的荜茇酰胺后,荜茇酰胺原料药组各时间点的平均血药浓度均低于荜茇酰胺白蛋白纳米粒组。荜茇酰胺白蛋白纳米粒的半衰期(T1/2)是荜茇酰胺原料药的2.04倍,平均驻留时间(MRT0-∞)是荜茇酰胺原料药的1.61倍,血浆清除率小于荜茇酰胺原料药。在8 h左右,荜茇酰胺原料药组血浆中基本检测不到药物,荜茇酰胺白蛋白纳米粒组仍有药物存在,药物在体内滞留时间延长。药时曲线下面积(AUC0-∞)是荜茇酰胺原料药的2.20倍,说明荜茇酰胺白蛋白纳米粒能在较长时间内保持一定的血药浓度,显示出一定的缓释性,提高了荜茇酰胺的体内生物利用度。最后,我们对荜茇酰胺白蛋白纳米粒的体外抗肿瘤作用进行了研究。结果表明,荜茇酰胺可以显著抑制肝癌Hep G2细胞增殖,作用效果存在剂量依赖性,随着荜茇酰胺浓度的增加,药物对Hep G2细胞的增殖抑制作用逐渐增强。同时,相同浓度的荜茇酰胺白蛋白纳米粒对Hep G2细胞的抑制作用明显强于荜茇酰胺,说明荜茇酰胺白蛋白纳米粒可以增强荜茇酰胺对肿瘤细胞的增殖抑制作用。为了探讨荜茇酰胺杀伤Hep G2细胞的作用机制,测定了细胞内活性氧水平的变化。结果表明,随着荜茇酰胺浓度的增大,细胞内活性氧水平逐渐增强。同时,与荜茇酰胺相比,荜茇酰胺白蛋白纳米粒由于其增强的肿瘤摄取能力而具有较高的活性氧水平。综上所述,初步推断荜茇酰胺可以通过诱导细胞内的活性氧水平升高,从而杀灭肝癌细胞。