伏马菌素B1对Sf9细胞毒性及作用机理研究

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伏马菌素(Fumonisins,FBs)是由串珠镰刀菌(Fusarium vertieilliodes)和再育镰刀菌(Fusarium proliferatum)产生的一类水溶性代谢物,是污染粮食作物及其制品的一种主要真菌毒素,也是2B类致癌物(可能致癌物),对动物和人类的健康有很大的潜在危害。目前为止,有关伏马菌素毒性作用机理尚不是很清楚;同时,伏马菌素对昆虫细胞的毒性及作用机制也不明确。Sf9细胞系是草地贪夜蛾(Spodoptera frugperda)的卵巢细胞,易培养,不需要使细胞孵育在CO2中,且可在细胞水平提供相应的信息,是药物毒性研究有力可靠的工具。本研究以Sf9细胞为供试细胞,开展伏马菌素对Sf9细胞的毒性及作用机理研究,研究结果如下:1、采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测定了不同浓度(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的伏马菌素B1对Sf9细胞的毒性。处理48 h后,Sf9细胞增殖的抑制率分别为10.5%,20.3%,30.9%,49.9%和65.4%。2、选取增殖抑制率为10%、30%、50%对应浓度(25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L)的伏马菌素B1处理Sf9细胞,48 h后,采用倒置显微镜观察Sf9细胞形态的变化。结果发现,对照组细胞外部形态饱满,生长状态良好,25 mg/L的伏马菌素B1处理Sf9细胞后,部分细胞膨大,多数细胞仍可增殖;50 mg/L的伏马菌素B1处理Sf9细胞后,膨大状态细胞比例增加,部分细胞出现空泡;200 mg/L的伏马菌素B1处理Sf9细胞后,细胞增殖受到明显抑制,空泡化细胞比例增加,且部分细胞出现脱壁现象。3、以抑制率为10%、30%、50%浓度(25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L)的伏马菌素B1处理Sf9细胞,48 h后观察,发现伏马菌素B1引起Sf9细胞G2/M期的阻滞;引起Sf9细胞膜电位去极化;引起Sf9细胞发生凋亡,凋亡率分别为16.65%、16.89%和21.90%;还可引起Sf9细胞线粒体膜电位超极化。4、以抑制率为50%浓度的伏马菌素B1处理Sf9细胞,进行转录组分析,筛选差异表达基因。差异明显的基因主要有:(1)解毒药物代谢相关基因及代谢通路:Sf9细胞主要通过启动细胞色素P450(Cytochrome P450)、谷胱甘肤-S-转移酶(Glutathione-S-transferases,GSTs)、尿苷二磷酸-糖基转移酶(UDP-glucuronosyl transferase,UGTs)基因的过量表达来应对伏马菌素B1的毒性作用。(2)生长发育相关基因及代谢通路:伏马菌素B1通过影响细胞的微管结合蛋白1、细胞粘附分子蛋白、生长因子蛋白及打破昆虫体内蜕皮激素和保幼激素的平衡等来影响细胞的增殖。(3)免疫相关基因及代谢通路:Sf9细胞启动Toll样受体信号通路和吞噬体信号通路产生免疫反应来应对伏马菌素B1对机体的伤害。(4)凋亡相关基因及代谢通路:伏马菌素B1诱导Sf9细胞启动JNK和p38 MAPK信号转导通路,加快细胞凋亡的进程,进而引起细胞凋亡。(5)其他代谢相关基因及代谢通路:除上述代谢之外,本研究还涉及了鞘脂类代谢、碳水化合物代谢、嘧啶和嘌呤代谢和氨基酸代谢。
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