肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN），又称GDF-8（growth differentiationfactor8），是体内广泛存在的一种糖蛋白，属于转化生长β（transforming growthfactor β, TGF-β）超家族，是骨骼肌生长和发育的负调控因子，主要作用是抑制成肌细胞的增生与分化。研究发现，在小鼠体内注射MSTN抗体可以增加骨骼肌的量，并使小鼠肌肉萎缩症状明显改善。在鸡受精卵中注射MSTN抗体，结果发现鸡的体重增加，表明通过制备肌肉生长抑制素的拮抗物来阻断其分子作用通路，可以有效的促进动物肌肉的生长和发育，为改善肉类品质开辟了一条新途径。因此，本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素的功能为出发点，通过抗体技术制备MSTN多克隆抗体和纳米抗体两种途径，探究一条促进绵羊(肌肉)生长的途径，为制备有效的促绵羊生长制剂奠定基础。本文的主要研究内容如下:1.克隆MSTN成熟肽基因，制备MSTN多克隆抗体并对其安全性和效果进行检测验证：利用PCR克隆MSTN成熟肽基因，构建原核表达载体，获得纯化的目的蛋白，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，将其侵染绵羊肌肉细胞并通过检测LDH的释放量，最后注射羔羊进行效果验证；结果成功构建出MSTN原核表达载体，并进行原核表达获得纯度较高的目的蛋白；免疫动物制备出的多克隆抗体效价为1:25600；细胞毒性试验结果表明，制备的MSTN多克隆抗体对绵羊肌肉细胞无毒害作用；促生长效果验证试验显示，与对照组相比，肌肉注射多克隆抗体的羔羊月增重量明显增加。以上研究结果表明，通过制备MSTN多克隆抗体可以成为一条开发安全、高效的促绵羊生长制剂的途径。2.利用纳米抗体技术，构建纳米抗体基因文库；获得纯化的免疫抗原蛋白，免疫骆驼，分离淋巴细胞并克隆单域重链抗体基因，将基因片段与pCANTAB-5E载体连接，电转化至TG1大肠杆菌中，构建纳米抗体基因文库，并对基因文库进行鉴定；结果克隆获得单域重链抗体片段，成功构建出纳米抗体基因文库，文库库容量达到1×107。这为筛选高特异性的单域重链抗体片段，进而开发高效且廉价的促动物生长制剂奠定了基础。本文实验结果表明，成功构建出绵羊MSTN原核表达载体，制备的绵羊MSTN多克隆抗体具有生物学活性，对肌肉细胞无细胞毒性，促生长效果验证显示，该多克隆抗体可有效地促进绵羊的生长，这为促生长制剂的开发提供了实践依据。另外，本研究成功构建了绵羊MSTN纳米抗体库，经验证抗体库容量达到1×107，可满足后期实验要求，为纳米抗体片段的筛选奠定基础。