【摘 要】
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目的:验证星形胶质细胞膜蛋白Glia CAM蛋白在星形胶质细胞分泌的外泌体上特异性表达,并建立从脑脊液中富集此类Glial CAM蛋白表达阳性外泌体亚群的方法,为下游蛋白组学研究和基因组学研究做准备。方法:通过差速离心法从原代星形胶质细胞的培养基中提取外泌体,应用流式细胞技术、Western Blot技术、NTA检测技术及TEM检测技术验证离心提取物为外泌体,且Glial CAM蛋白在此类外泌体样
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目的:验证星形胶质细胞膜蛋白Glia CAM蛋白在星形胶质细胞分泌的外泌体上特异性表达,并建立从脑脊液中富集此类Glial CAM蛋白表达阳性外泌体亚群的方法,为下游蛋白组学研究和基因组学研究做准备。方法:通过差速离心法从原代星形胶质细胞的培养基中提取外泌体,应用流式细胞技术、Western Blot技术、NTA检测技术及TEM检测技术验证离心提取物为外泌体,且Glial CAM蛋白在此类外泌体样本中表达。使用包被了Biotin-Glial CAM抗体的链霉亲和素琼脂糖磁珠对培养基中Glial CAM蛋白阳性的外泌体进行富集,并采用流式细胞技术验证胞外囊泡亚群成功富集的可行性,根据最终结果建立完善的富集方法,以脑脊液为实际样本进行上述实验,开发从脑脊液内众多外泌体亚群中分离富集Glial CAM蛋白表达阳性的外泌体亚群新方法。结果:1、流式细胞仪检测和Western Blot结果显示,差速离心后可获得外泌体样本,并且Glial CAM蛋白在外泌体上阳性表达,且NTA,TEM检测提取物也符合外泌体生物学特征。2、使用Biotin-Glial CAM抗体免疫磁珠对培养基中外泌体进行富集,结果不理想,考虑外泌体在操作过程中丢失过多、Biotin-Glial CAM抗体与免疫磁珠结合不佳等可能。3、脑脊液样本中可以成功分离并检测到Glial CAM蛋白阳性外泌体,并能用包被Biotin-Glial CAM抗体的免疫磁珠成功富集到Glial CAM蛋白表达阳性的外泌体亚群。结论:我们成功地检测到星形胶质细胞分泌的外泌体上带有星形胶质细胞膜蛋白Glial CAM蛋白,虽然在培养基样本中使用免疫磁珠富集Glial CAM蛋白阳性外泌体结果不理想,但是在脑脊液样本中可以成功地从复杂的外泌体亚群中富集Glial CAM蛋白表达阳性的星形胶质细胞来源的外泌体。这种分离特定外泌体亚群方法的建立可以为进一步的蛋白组学研究以及基因组学的研究提供便利,为神经疾病诊疗提供有力工具。
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