【摘 要】
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植物MicroRNAs（miRNAs）广泛参与植物体内的调控,如植物生长发育、激素合成与逆境胁迫等各种生物过程。miR319在生物胁迫与非生物胁迫起到至关重要的作用,然而在茶树中miRNA响应生物与非生物胁迫的研究鲜有报道。本研究根据高通量测序结果获得了Csn-miR319c成熟序列,通过降解组测序结果和RACE技术获得了CsnTCP2的cDNA全长。随后利用RLM-5’RACE、GUS染色验证了
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植物MicroRNAs（miRNAs）广泛参与植物体内的调控,如植物生长发育、激素合成与逆境胁迫等各种生物过程。miR319在生物胁迫与非生物胁迫起到至关重要的作用,然而在茶树中miRNA响应生物与非生物胁迫的研究鲜有报道。本研究根据高通量测序结果获得了Csn-miR319c成熟序列,通过降解组测序结果和RACE技术获得了CsnTCP2的cDNA全长。随后利用RLM-5’RACE、GUS染色验证了Csn-miR319c及其靶基因的关系,并通过Northern blot和qRT-PCR实验对Csn-miR319c及其靶基因的表达模式进行了研究。主要结果如下:1.利用RACE技术克隆了茶树TCP的cDNA全长,命名为CsnTCP2,全长序列为2046bp,开放阅读框（ORF）为1329 bp,编码339个氨基酸。2.利用RLM-5′RACE技术验证了Csn-miR319c的靶基因为CsnTCP2,剪切位点在靶基因编码区内且特定的在Csn-miR319c的5′第12与13碱基之间。3.构建了瞬时表达载体pBI121-35S::Csn-miR319c与pBI121-35S::CsnTCP2,通过电击法将载体导入农杆菌EHA105中,并成功转染本氏烟（嫩叶）中,根据GUS染色结果验证了Csn-miR319c负调控其靶基因CsnTCP2。4.利用Northern blot和qRT-PCR技术分析了Csn-miR319c及其靶基因的表达在茶树七个组织中存在组织特异性,Csn-miR319c及其靶基因CsnTCP2的表达存在负相关性。5.利用qRT-PCR技术分析了Csn-miR319c在茶尺蠖取食诱导与激素处理（Me JA、ABA、SA处理）下动态调控靶基因CsnTCP2表达,从而响应各种逆境胁迫。本研究表明Csn-miR319c通过调控靶基因表达的方式响应茶树对生物胁迫与非生物胁迫,参与了适应性的调节,该研究为茶树的抗虫害分子机理提供了重要的实验依据,为茶树栽培与有关性状的分子育种提供了重要的切入点。
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