前言 骨肉瘤是一种严重影响青少年健康的恶性骨肿瘤，转移早，预后差。目前临床上尚缺乏判定其恶性程度和估计预后的参考指标。 B细胞淋巴瘤蛋白6(B cell lymphoma 6 BCL-6)是在恶性淋巴瘤中发现的一种原癌基因表达蛋白，这种原癌基因蛋白的高表达与某些淋巴瘤患者的预后有关。近年的研究表明该原癌基因不仅存在于恶性淋巴瘤组织中，而且还存在于卵巢癌等恶性肿瘤组织中。BCL-6基因位点在染色体移位带3q27，包括26kb碱基对和9个外显子，基因移位起始点位于外显子3，锌指分布基序在外显子6-9。 Lossos IS等人报告，一组BCL-6高表达的恶性淋巴瘤患者的平均生存期(OS)为171个月，而另一组BCL-6低表达的患者平均生存期仅24个月，两者有显著性差异。表明BCL-6可以作为某些恶性淋巴瘤预后判定的辅助指标。 Albagli O等人报告，在应用人骨肉瘤U20S细胞株进行的实验研究中发现BCL-6所调节的生长压制与对S期的损害和凋亡有关。但是，Albagli O等人没有进行临床研究，国内未见相关的报告。 本实验拟应用免疫组织化学方法检测骨肉瘤和骨软骨瘤中BCL-6的表达情况，并对实验组中骨肉瘤患者的临床预后进行初步的调查，探讨BCL-6在骨肉瘤发生．发展中的作用及其对患者预后的影响。 实验材料 l，标本：辽宁省肿瘤医院病理科1993年7月－2001年12月的30例骨肉瘤（无皮质旁骨肉瘤）石蜡标本，选材符合以下条件：l，再次经三名病理专家确认诊断。2，术前未经过化疗和免疫治疗。3，有系统随访记录。4洞期骨软骨瘤石蜡标本20例，作为对照组。 2．病例资料：上述骨肉瘤标本对应的病例叨例，男性18例，女性12例，年龄10－sl岁，平均年龄20岁。股骨下段12例，腥骨上段8例，股骨上段3例，肢骨上段4例，其它部位3例／ff床分期根据＊—ecbng GTGTM分期：IIA：4例，11B：23例，1尺A：3例。术式：广泛切除＋保肢术或截肢术。 3．试剂：鼠抗人BCL－6单克隆抗体，二步法免疫试剂均购自福建迈新公司。 实验方法 二．石蜡切片，常规HE染色。 2．免疫组化染色：sum石蜡切片常规脱蜡，水化，3％过氧化氢溶液室温 10分钟，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，再经 PH．8．0＊＊TA缓冲液高压抗原修复泊人阮L－6一抗（工作浓度1：so入加链霉菌抗生物素蛋白工作液，室温60分钟，DAB染色，苏木素复染，常规封片，每次实验均用PBS代替BCL－6一抗做阴性对照。 3．结果判定：以OLYMPUS生物显微镜观察染色切片，高倍镜下观察20个视野，以细胞核（或浆）呈棕黄色至深棕黄色颗粒为阳性细胞，根据切片中阳性细胞的百分比，分为弱阳性《阳性细胞 ·二·＜25％，＋入中度阳性（阳性细胞25％－50％，＋＋）和强阳性（阳性细胞＞50啪，w八 4．数据处理：采用X’检验，进行统计学处理。 实验结果 1．30例骨肉瘤组织中，BCL－6总的阳性表达率40％门／30入BCL－6在骨肉瘤细胞核和胞浆中均有表达，主要位于细胞核内，其中强阳性 7例08．3％，7八2入中度阳性率二例门．7％，2／12）弱阳性3例（25畅，3／12）。 2．对照组20例骨软骨瘤BCL－6表达均为阴性。 3．本组病例平均随访53个月，平均无瘤生存20个月，平均生存期35个月，死亡15例K0％人一年生存率83．3％（24／30人三年生存率50．0％（5力0儿其中 12例BCL－6阳性患者术后三年生存率为75％O八 入而18例BCL－6阴性术后三年生存率为 33．3％K八8）。BCL－6阳性患者术后生存期明显高于阴性患者（P＜O．05）。 讨 论 近年来随着分子生物学的发展和人类基因图谱的发现，证明恶性肿瘤的发生．发展是一个涉及多基因事件的复杂过程。 BCL－6是 Ye BH，Rao PH等人在 1993年研究非何杰金氏淋巴瘤免疫基因图谱时克隆出的原癌基因，基因位点在染色体移位带 3q27。而后，oSSOS IS等人于 2001年报道了仇－6表达与弥漫性大细胞性淋巴瘤患者生存期的关系，结果显示：BCI－6过度表达的患者平均生存期（OS）达 171个月，而h－6低表达的患者平均生存期仅24个月，两组有显著差别。作者认为在弥漫性大 ·3·细胞淋巴瘤的病例中的Bcl－6的mRNA表达可以作为一种判定预后的指标。这个研究显示了从基因产物的角度判定恶性肿瘤患者预后的可能性。Alba吵O等人应用人骨肉瘤UZOS细胞株进行BCI－6的研究表明：BCL－6在骨肉瘤细胞株也存在阳性表达现象，但是未做临床相关研究。 本组30例骨肉瘤病例中，阳性表达率为40％，说明BCL－6原癌基因在人体骨肉瘤病理组织中确有与弥漫性大纲胞淋巴瘤类似的表达，与Alb渺O等人的研究结论相符合。但是，其与临床预后的关系根据现有随访资料尚不足以定论，原因是：1．该组病例来源不是前瞻性研究的结论，而是根据随访资料判断，不能排除随访资料的不确定