第一部分ADAMTS13和VWF在急性髓细胞白血病中的检测及意义背景与目的：血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13），属于ADAMTS家族的第十三个成员，其作用于血管性血友病因子（vWF）的A2区对其进行裂解而发挥生理作用。当体内ADAMTS13活性降低或缺失时，vWF可以聚集成超大分子量vWF（UL-vWF），进而与血小板结合形成微血栓，导致血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的发生。近年来研究显示其他血栓性疾病、炎症性疾病、恶性肿瘤等患者的血浆均有ADAMTS13活性的下降，有关ADAMTS13和vWF在急性白血病中的研究甚少。本文旨在检测ADAMTS13活性和vWF抗原在急性髓细胞白血病（AML）患者治疗前后的变化情况，并探讨相关的临床意义。方法：病例来源于苏州大学附属第一医院血液科住院的116例初治AML患者，其中急性早幼粒细胞白血病（M3）组41例，非M3组75例。根据患者初诊时是否合并感染分为感染组（n=57）和无感染组（n=59）；根据是否合并弥散性血管内凝血（DIC）分为DIC组（n=40）和无DIC组（n=76）。收集AML患者治疗前和诱导化疗后缓解期的血浆标本。以荧光标记vWF73底物荧光共振能量转移试验（FRETS-vWF73）检测血浆中的ADAMTS13活性，以ELISA试剂盒检测vWF抗原量。结果：（1）ADAMTS13活性和vWF抗原在AML患者中的改变：AML患者初诊时的ADAMTS13活性明显低于正常对照组：（65.5±27.2）%vs（105.0±33.8）%（P<0.01）；经标准诱导化疗后缓解期患者的ADAMTS13活性为（95.7±38.2）%，明显高于治疗前组（P<0.01），与正常对照组无显著差异（P>0.05）。AML患者初诊时的vWF抗原明显高于正常对照组：（238.9±119.6）%vs （116.6±43.4）%（P<0.01）；缓解期的vWF抗原为（147.1±86.4）%，明显低于治疗前组（P<0.01），仍高于正常对照组（P<0.05）。（2）ADAMTS13活性和vWF抗原与感染的关系：初诊AML患者治疗前合并感染组患者的血浆ADAMTS13活性明显低于无感染组：（57.1±28.8）%vs（73.7±24.7）%（P<0.01）。vWF抗原明显高于无感染组：（265.7±128.1）%vs （213.2±105.6）%（P<0.05）。（3）ADAMTS13活性和vWF抗原与DIC的关系：初诊AML患者伴DIC组的ADAMTS13活性明显低于无DIC组：（46.5±19.3）%vs （75.6±26.6）%（P<0.01）。DIC组的vWF抗原明显高于无DIC组：（281.5±119.1）%vs （216.6±114.4）%（P<0.05）。（4）ADAMTS13活性和vWF抗原在M3组和非M3组的比较：M3组的ADAMTS13活性明显低于非M3组：（53.8±23.5）%vs（72.0±28.3）%（P<0.01）。vWF抗原明显高于非M3组：（269.5±119.4）%vs（222.5±117.2）%（P<0.05）。（5）ADAMTS13活性和vWF抗原与AML患者临床特征的关系：AML患者治疗前的ADAMTS13活性与vWF抗原呈负相关关系（r=﹣0.23，P=0.02）。多重线性回归分析显示DIC、感染和凝血酶时间是ADAMTS13下降的独立危险因素；DIC和感染是影响vWF抗原的独立危险因素。结论：（1）AML患者初诊时伴有ADAMTS13活性的降低和vWF抗原的升高。经诱导化疗后缓解期患者的ADAMTS13活性回升，与正常人无统计学差异；vWF抗原下降，但仍高于正常对照组。（2）M3是AML的一种特殊类型，容易合并出凝血异常，其ADAMTS13活性较其他AML患者显著减低，vWF抗原较其他AML患者显著增加。（3）AML患者合并感染或DIC的血浆ADAMTS13活性较无感染或无DIC患者显著减低；vWF抗原量则显著增加。感染和DIC是影响ADAMTS13活性和vWF抗原的独立危险因素。因此，ADAMTS13和vWF在AML的发生发展、炎症和DIC的形成过程中起重要作用。第二部分Ph染色体阴性骨髓增殖性肿瘤患者微颗粒的测定及其意义背景与目的：Ph染色体阴性骨髓增殖性肿瘤（Ph-MPN）包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）和原发性骨髓纤维化（PMF）。Ph-MPN患者外周血表现为一系或多系细胞增多，JAK2V617F基因突变对Ph-MPN的诊断具有重要价值。血栓是Ph-MPN患者常见的并发症。微颗粒（MPs）是指从各种细胞膜上脱落下的膜性小囊泡，具有很强的促凝血活性，大量研究表明肿瘤患者伴有MPs的升高，并与血栓并发症密切相关。而MPs在Ph-MPN患者中的研究相对较少，本文旨在检测Ph-MPN患者血浆中红细胞微颗粒（RMPs）、血小板微颗粒（PMPs）、内皮细胞微颗粒（EMPs）和组织因子微颗粒（TF+MPs）的水平，并探讨它们与临床相关指标的关系及临床意义。方法：收集苏州大学附属第一医院血液科2012年3月至2013年12月就诊的Ph-MPN病人92例，包括ET60例、PV20例和PMF12例。男性40例，女性52例，中位年龄为52岁。根据患者是否存在血栓并发症分为血栓组（n=23）和非血栓组（n=69）。根据患者确诊是否伴有脾脏肿大分为脾肿大组（n=50）和无脾肿大组（n=42）。根据是否存在JAK2V617F基因突变分为JAK2V617F突变阳性组（n=55）和JAK2V617F突变阴性组（n=47）。抽取Ph-MPN患者及正常对照者空腹外周静脉血3ml，以枸橼酸钠抗凝，3000r/min离心15min，收集乏血小板血浆于-80℃冻存。以藻红蛋白标记特异性荧光抗体CD235a-PE、CD61-PE、CD62E-PE和CD142-PE分别标记红细胞、血小板、内皮细胞和组织因子（TF），采用流式细胞术（FCM）方法检测RMPs、PMPs、EMPs及TF+MPs的水平。结果：（1）MPs在Ph-MPN患者组和正常对照组的比较：92例Ph-MPN患者的RMPs、PMPs、EMPs和TF+MPs依次分别为（135.2±291.6）/μl、（960.7±1539.1）/μl、（808.8±1244.5）/μl和（103.2±303.6）/μl，均显著高于正常对照组（P<0.05）。另外，Ph-MPN不同亚型间MPs的比较提示：PMF组4种MPs均显著高于PV组（P<0.05）；PMF组的RMPs显著高于ET组（P<0.05）。（2）MPs与血栓并发症的关系：血栓组的4种MPs水平均明显高于非血栓组：RMPs（375.9±504.5）/μl vs （54.9±72.6）/μl（P<0.01）；PMPs（1989.7±2023.7）/μlvs （617.7±1169.5）/μl（P<0.01）；EMPs（2000.5±1851.7）/μl vs（411.6±568.2）/μl（P<0.01）；TF+MPs：（268.0±566.0）/μl vs （48.2±86.5）/μl（P<0.01）。（3）MPs在脾肿大组和非脾肿大组之间的比较：脾肿大组的4种MPs水平均明显高于非脾肿大组：RMPs （190.0±371.0）/μl vs （70.0±127.3）/μl （P<0.01）；PMPs（1447.5±1873.1）/μl vs （381.2±656.8）/μl （P<0.01）；EMPs（1092.1±1518.9）/μl vs（471.6±682.4）/μl（P<0.01）；TF+MPs（158.0±403.4）/μl vs （38.0±45.3）/μl（P<0.01）。（4）MPs水平与JAK2V617F基因突变的关系：JAK2V617F突变阳性组的PMPs显著高于JAK2V617F阴性组（P<0.05），其他3种MPs未见统计学差异。结论：Ph-MPN患者的MPs水平明显高于正常对照组，并与血栓并发症和脾脏肿大显著相关。PMF组的MPs水平升高的更明显，JAK2V617F突变阳性组的PMPs高于JAK2V617F阴性组。提示MPs在Ph-MPN疾病的的发生、进展过程中起一定作用，并且MPs的释放可以促进血栓的形成。