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阿奇霉素(Azithromycin,AZM)属于15元环大环内酿类(Macrolide,MAL)抗生素,临床上用于人上下呼吸道、泌尿道、皮肤及软组织感染和性传播疾病的预防和治疗,目前已被农业部列为畜禽禁用兽药。AZM违规用于畜禽养殖,会影响畜禽疫病防治和畜禽产品安全、增加细菌产生耐药性的风险、威胁人类健康。虽然国家明令禁止,但养殖环节带来的经济效益受损,养殖户将抗生素添加于饲料或针剂注射等方式给药,导致人用抗生素仍被违规使用于畜禽,已成为威胁畜禽产品安全的新隐患。目前国内外尚未颁布任何基质中AZM的检测标准,国内外学者已开展部分基质中AZM检测技术研究,饲料、鸡蛋等基质中AZM检测技术未见研究报道。因此本实验以配合饲料(育肥猪配合饲料、蛋鸡配合饲料)和动物可食性组织(猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋)为对象,建立配合饲料和动物可食性组织中AZM的液相色谱串联质谱(Liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并应用该检测方法对四川省配合饲料违规添加AZM和动物可食性组织中AZM残留进行风险监测,为饲料及动物可食性组织中AZM检测标准的建立,加大监管力度,加快实现无抗养殖,保证食品安全提供基础数据及可靠手段。主要研究内容及结果如下:试验一猪鸡配合饲料中AZM的LC-MS/MS检测技术研究及风险监测本试验旨在通过对样品的提取溶剂和净化方法以及色谱-质谱检测条件的优化,建立配合饲料中AZM的LC-MS/MS检测方法,并通过方法的选择性、遗留影响、基质效应、线性、检出限及定量限、回收率与精密度等方面验证方法的有效性。结果如下:(1)猪鸡配合饲料使用乙腈提取,MCX固相萃取柱净化,采用BDS Hypersil C18(2.4μm,100X2.1mm)色谱柱分离,以甲醇-0.05mol/L乙酸铵水溶液为流动相,正离子模式电离,多反应监测模式(Multiple reaction monitoring,MRM)检测,同位素内标(Internal standard,IS)法定量。(2)猪鸡配合饲料中的AZM在l-150μg/L范围内呈良好的线性,相关系数r2=0.9991,猪鸡配合饲料检出限(S/N≥3)分别为2.8μg/kg、2.2μg/kg,定量下限(S/N≥/00)均为8.4μg/kg;在0.5,1,5,10mg/kg加标水平下育肥猪配合饲料中AZM的加标回收率为90.72%-106.60%,批内和批间相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)分别为 0.88%-4.01%和 3.24%-6.32%,在 0.5,1,5,10mg/kg加标水平下蛋鸡配合饲料中AZM的加标回收率为84.14%-102.30%,批内和批间RSD分别为0.58%-5.36%和3.10%-5.45%。该方法准确性好、灵敏度高、选择性强,无基质干扰,可用于育肥猪和蛋鸡配合饲料中AZM含量的测定。(3)应用该方法测定了四川省36个育肥猪养殖场的36份育肥猪配合饲料和18个蛋鸡养殖场的18份蛋鸡配合饲料中的AZM,结果显示,采集的36份育肥猪配合饲料以及18份蛋鸡配合饲料均未检出AZM,因此,推断通过饲料途径违规使用AZM可能性小,但不排除小范围拌料。试验二猪鸡可食性组织中AZM的LC-MS/MS检测技术研究及风险监测本试验使用试验-建立的上机条件和净化方法,优化了猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋样品的提取溶剂,建立了猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋中AZM的LC-MS/MS检测方法,通过方法的选择性、遗留影响、基质效应、稳定性、线性、检出限及定量下限、回收率与精密度等方面验证了方法的有效性。结果如下:(1)猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋经乙醚提取,MCX固相萃取柱净化,BDS Hypersil C18(2.4 μm,100×2.1 mm)色谱柱分离,流动相为甲醇-0.05mol/L乙酸铵,正离子模式电离,MRM检测,同位素IS法定量。(2)猪肉、猪肝、鸡肉中AZM在1-150μg/L、鸡蛋中AZM在1-200μg/L范围呈良好的线性关系,相关系数(r2)>0.999,猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋的检出限分别为 0.24μg/kg、0.21 μg/kg、0.20μg/kg、0.28μg/kg,方法定量下限(S/N≥10)分别为 0.80μg/kg、0.69μg/kg、0.53μg/kg、0.84μg/kg,猪肉、猪肝、鸡肉中 AZM在0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg三个添加浓度回收率范围分别为97.47%-105.90%、92.75%-104.73%、104.03%-113.09%;批内 RSD 分别为1.81%-3.99%、2.24%-4.05%、1.62%-3.20,批间 RSD 为 0.90%-4.38%、3.60%-4.80%、2.54%-2.60%,鸡蛋在 0.075mg/kg、0.15mg/kg、0.225mg/kg 三个添加浓度的回收率为 100.32%-109.01%,批内 RSD 为 0.56%-2.26%,批间 RSD3.56%-4.49%,该方法准确性好、灵敏度高、选择性强,无基质干扰,可用于猪鸡可食性组织中AZM的测定。(3)应用该方法测定了四川省省会城市和6个地级市的市售猪肉(87份)、猪肝(37份)、鸡肉(52份)和鸡蛋(59份)中的AZM。结果,AZM在猪肉样品中未检出,但在猪肝、鸡肉、鸡蛋样品中检出AZM,其检出率分别为3.45%、7.69%和 1.96%,最高含量分别为 12.64μg/kg、27.85μg/kg、139.70μg/kg,表明AZM有违规用于畜禽养殖的现象,通过饲料途径可能性小,其他可能途径为肌肉注射和饮水或饲喂时小范围拌料。因AZM在动物体内代谢,产生的代谢产物种类多,部分有药物活性,未检测到AZM原型不能说明在养殖过程中未使用AZM。因此,可通过增加样本数及覆盖面,扩大采样途径,确定AZM的代谢产物种类,通过AZM及其代谢产物的检测,监控AZM的使用,从而更全面地评价饲料中AZM的安全性。综上所述,本论文的主要结论为:通过提取溶剂、净化方法及色谱-质谱条件的优化建立的育肥猪、蛋鸡配合饲料和猪肉、猪肝、鸡肉、鸡蛋四种动物可食性组织中AZM的LC-MS/MS检测方法准确性好、灵敏度高、选择性强,无基质干扰。测定的四川省育肥猪配合饲料(36个)、蛋鸡配合饲料(18个)、市售猪肉(87份)、猪肝(37份)、鸡肉(52份)和鸡蛋(59份)中的AZM的结果为:饲料、猪肉未检出,猪肝、鸡肉、鸡蛋的检出率分别为3.45%、7.69%和1.96%,AZM 最高含量分别为 12.64μg/kg、27.85μg/kg、139.7μg/kg,表明 AZM有违规用于畜禽养殖的现象。