目的：随着不孕症发生率的逐年上升，辅助生殖技术(助孕技术，ART)，包括宫腔内人工授精(IUI)、体外受精胚胎移植(IVF-ET)、卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)等技术，因其治疗不孕的有效性而受到广泛关注。目前，ART各种技术日趋成熟，成功率也相对稳定，但ART在治疗男性不育症选择依据和治疗不孕症结局预测时，不论在临床和机制研究方面，都存在许多需要认识和解决的问题，主要是： ①对男性不育患者ART各项技术适应症缺乏深入探讨，除了对严重少弱畸精患者采用ICSI达到共识外，对其他类型男性不育患者合理选择何种助孕技术，临床上没有系统和客观的依据可供参考。 ②ICSI避开了精子自然选择受精环节，人为选择形态和活力好的精子并不能确保其遗传物质正常。换句话说，ICSI技术的成功是以带有异常遗传物质的妊娠风险增大为代价的，这是该项技术令人遗憾之处。 ③在ART常规精液处理过程中，精子优选与体外培养的同时也会造成精子的氧化应激(oxidativestress，OS)损伤，增加DNA损伤概率。而有DNA损伤精子用于ART不仅受精率、妊娠率低，还可能对子代造成危害，增加遗传缺陷风险等一系列问题。但是，目前仅有少量研究评价这些精子质量，不能有效满足ART治疗中精子优选的需要。 ④随着ART技术的发展与应用，助孕治疗并发症卵巢过度刺激综合征(ovarianhyperstimulationsyndrome，OHSS)、助孕成功后流产、异位妊娠、多胎妊娠等发生率都比自然妊娠高，严重威胁母婴安全。不孕症治疗除了获得妊娠外，还应重视妊娠过程顺利，母子安全。但是，目前对这些情况仍缺乏系统有效的监测指标，为孕早期对妊娠安全性与转归作出及时有效的判断，并提出合理化处理意见提供客观依据。 总之，不孕症现代治疗目的不仅仅只关心是否能受孕，而是合理选择ART、改善妊娠结局、减少遗传风险，关注妊娠结局安全性等，这就迫切需要一种能评估精液质量的新技术，为ART的合理选择提供客观参考依据；以及建立早孕期系统化监护体系，有效指导临床采取合理化治疗方案，减少不良妊娠，保障母子安全。 本研究在临床实践和理论研究的基础上，着重探讨了ART治疗非严重男性不育的相关问题，以及ART治疗不孕患者结局预测的相关问题： ①从两个方面建立了ART适应症选择的客观指标：第一，建立了IUI系统精液参数评分指标，为IUI适应症选择提供客观依据；第二，探讨了不同男性不育因素、不同精液处理技术对精子DNA的损伤及可能损伤机制，在分子水平——精子遗传物质DNA完整性基础上，建立了ART选择以及不同精液标本理想处理技术选择的客观指标。 ②评估了同胞卵IVF联合ICSI治疗非严重男性不育或不明原因不育患者，以及ICSI治疗常规IVF失败病例的临床价值，为这类患者避免受精失败而改选其它ART提供了依据。 ③建立了早期预测OHSS指标和预测妊娠结局指标，用于临床实践，指导及时选择合理化干预措施。 方法：①统计分析IUI治疗周期中，特定(男性因素和不明原因)不育患者各时段精液参数与临床妊娠的关系，筛查和建立能预测IUI成败的指标，即系统精液参数评分指标(systemicsemenparametersscores，SSPS)。 ②将来自特定不育患者同胞卵，随机分配分别接受IVF、ICSI治疗；比较各组治疗结局，以及不育因素对体外受精的影响。并评价ICSI治疗常规IVF失败病例的价值。 ⑨分别用单细胞凝胶电泳(SCGE)、流式细胞术(FCM)等手段检测这类患者的原始精液DNA损伤程度，活性氧物质(ROS)/抗氧化能力(TAC)水平，和凋亡情况；再用上游法、密度梯度离心法处理同一份标本后，检测处理后标本ROS水平和线粒体膜电位(△Ψm)，将各类检测结果与常规精液参数相关性分析。 ④根据OHSS发生时间分早发组、晚发组，比较两组患者临床特征和实验室资料，以及妊娠结局，回归分析筛查助孕治疗并发症OHSS发生发展预测指标。并根据ART治疗受孕患者排卵后第16天血β绒毛膜促性腺激素(β-humanchorionicgonadotropin，β-HCG)值及其上升情况，结合妊娠结局，建立预测助孕治疗早孕期妊娠转归结局的客观指标。 结果：①常规精液参数不能预测IUI治疗结局；但处理后总正常活动精子数(post-processedtotalnormalmotilesperm，Post-TNMS)＜9.0×106；优选精子培养24小时后存活率(spermsurvivalrateafter24hoursofculture，SSR-C)＜75％，可预测IUI无法成功或妊娠率显著下降。统计分析发现：预测IUI成功的最佳SSPS指标为SSR-C联合Post-TNMS，联合指标预测IUI成功的阳性、阴性预测值、敏感性、特异性分别为91.3％、78.9％、85.1％、75.1％。 ②接受ICSI注射的同胞卵两原核受精率比接受常规IVF的高(P＜0.05)，总受精失败率低(P＜0.05)。非严重男性不育患者部分精液参数、精子功能，以及不明原因不育患者女方年龄、不育年限可能与体外受精有关。ICSI治疗常规IVF失败病例可获得与严重男性不育患者同样的效果。 ③男性不育组精子DNA损伤、ROS水平、凋亡率均明显高于生育男子(P＜0.05)；除DNA损伤外(P＜0.05)，ROS水平、凋亡率与不明原因不育患者差异无统计学意义。各组TAC含量也无统计学差异。仅发现男性不育组部分检测指标与常规精液参数的相关性；并发现两组不育患者精子DNA损伤与ROS存在相关性(r=0.65，P＜0.05；r=0.53，P＜0.05)，与凋亡相关性无统计学意义，以及两组ROS与凋亡间的弱相关性。 ④处理前精液参数异常(精液评分)者△Ψm低、ROS水平高，有相关性；且两者也呈负相关(r=-0.48，P＜0.05)；与白细胞精子症组相比：后者ROS水平更高(P＜0.01)。处理后精液参数均有不同程度提高，梯度离心法明显；各组优选精子除了△Ψm明显增加外，ROS也增加(白细胞精子症组下降，P＜0.05)，以上游法明显。少弱畸精子组采用不同分离技术的优选精子△Ψm与总正常活动精子数相关性均有统计学差异(P＜0.05)，白细胞精子症组ROS水平变化值与精液中白细胞数量有关(P＜0.05)。 ⑤HCG注射后发生OHSS的平均时间为9.3±4.7天，选择9天分早发组、晚发组；回归分析发现：仅中小卵泡评分与OHSS发生时间相关；用中小卵泡评分＞20分预测早发组OHSS发生的阳性、阴性预测值、敏感性、特异性分别为90.0％、92.0％、81.8％、95.8％。OHSS持续时间与是否妊娠或多胎妊娠有关，用OHSS持续时间＞7天、＜7天、＞12天可分别预测早发组妊娠、晚发组未孕和多胎妊娠。 ⑥血β-HCG水平与妊娠结局明显相关，排卵后第16天首次血β-HCG值在继续妊娠组显著高于不良妊娠组(P＜0.01)，血β-HCG＜100mIU/L者90.9％有不良妊娠结局，而血β-HCG＞400mIU/L(或＞500mIU/L)，则94.6％的(或全部)患者妊娠超过12周。 结论：①SSPS指标是预测IUI成败的有效指标，可作为IUI适应症选择的客观依据。 ②同胞卵IVF/ICSI技术能够避免受精失败；并可作为研究单一因素影响助孕治疗效果的有效手段。ICSI也是治疗常规IVF失败病例的有效方法。 ③不育患者存在精子DNA损伤，但不同因素不育患者损伤机制不同；精子DNA完整性是比常规精液参数好的预测男性生育力指标，可为ART的合理选择提供客观参考依据。 ④△Ψm可评估少弱畸精子组优选精子质量，ROS水平可评估白细胞精子症的精液处理效果。 ⑤早发OHSS与卵巢对外源性HCG过度反应有关，HCG日中小卵泡评分可预测OHSS的发生；晚发OHSS更多与胚胎种植后产生的内源性HCG有关，OHSS持续时间可判断妊娠情况。 ⑥排卵后第16天单次血β-HCG值是一项有意义的预测妊娠转归结局的指标。