目的:采用玳玳总黄酮有效部位为原料,设计并研制玳玳黄酮自微乳化微丸;考察玳玳黄酮自微乳化微丸的体外溶出特性;通过大鼠离体肠吸收实验及体内药代动力学研究,考察玳玳黄酮自微乳化微丸的肠吸收特点及其吸收机制,评价口服生物利用度的改善;建立玳玳黄酮自微乳化微丸的质量分析评价方法,为深入研制具有降脂作用质量可控的玳玳黄酮自微乳化微丸这一新型中药制剂,因地制宜地充分利用福建省丰富的中药玳玳资源提供科学的理论和实验基础。方法:1、采用课题组前期已优选的制备工艺与建立的质量控制方法,分离纯化得到质量稳定,总黄酮含量稳定大于75%的玳玳黄酮有效部位;以玳玳黄酮有效部位为原料,基于固体自微乳化给药系统(S-SMEDDS),设计研制玳玳黄酮自微乳化微丸。结合三元相图筛选玳玳黄酮自微乳化处方中油相、表面活性剂和助表面活性剂的种类和用量范围;采用单纯网格法优化处方,优选含药自微乳给药系统的制备方法:采用挤出滚圆技术,加入优选的固体辅料制备玳玳自微乳化微丸,采用正交试验优选玳玳黄酮自微乳化微丸的最佳制备工艺。2、通过考察微丸的外观性状、粒径分布以及成乳后的乳滴大小、稳定性及影响因素等检查评价玳玳黄酮自微乳化微丸的制剂质量。通过薄层色谱法鉴别组方主成分;分别采用紫外分光光度法、高效液相色谱法建立控制玳玳黄酮自微乳化微丸药效总成分黄酮和特征成分柚皮苷和新橙皮苷的含量测定方法,同时建立基于高效液相色谱法的特征图谱分析共有模式,从整体上综合评价和控制玳玳黄酮自微乳化微丸的内在质量。3、分别采用以柚皮苷和新橙皮苷为指标成分的高效液相色谱法,以及以总黄酮为评价指标的紫外分光光度法的溶出度测定方法,考察玳玳黄酮自微乳化微丸在不同pH值溶出介质中的溶出度(pH 1.0盐酸溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和蒸馏水),考察不同pH值溶出介质对玳玳黄酮自微乳化微丸体外释药特性的影响。分别运用零级动力学方程、一级动力学方程和Higuchi方程对溶出数据进行拟合,评价三种拟合方法的拟合优度,建立玳玳黄酮自微乳化微丸的体外释药模型,并采用相似因子(f2)分析溶出曲线。4、采用高效液相色谱-质谱联用技术,以大鼠离体外翻肠囊为模型,选择玳玳黄酮自微乳化微丸特征成分柚皮苷和新橙皮苷为评价指标,检测相同给药剂量下大鼠十二指肠、空肠、回肠3个肠段以及不同给药剂量下空肠肠囊内药效成分的浓度;在相同给药剂量下,比较玳玳黄酮自微乳化微丸与玳玳黄酮有效部位提取物中药效成分的肠吸收和促吸收效果,探讨其吸收机制。5、建立同时测定生物样品大鼠血浆中玳玳黄酮自微乳化微丸特征成分柚皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色谱法,比较玳玳黄酮自微乳化微丸与玳玳黄酮有效部位生物利用度、药动学参数等,评价玳玳黄酮自微乳化微丸口服生物利用度。结果:1、优选的玳玳黄酮自微乳化微丸组方由自微乳化浓缩液(玳玳总黄酮:Lauroglycol FCC:Tween 80:Transcutol HP=3:4:10:6,w/w)、微晶纤维素及乳糖按 10:12:5(w/w)组成。优化的制备工艺是按处方配比将玳玳总黄酮加入助表面活性剂Transcutol HP中溶解,再加入表面活性剂Tween 80和油相Lauroglycol FCC,搅拌形成均匀体系的棕黑色玳玳黄酮自微乳化浓缩液;按处方配比将浓缩液加入微晶纤维素和乳糖中,混匀,加水制成软材(水:总混合物=0.3～0.4:1,w/w);将软材投入挤出机内,筛板孔径1.0 mm,挤出频率为24 HZ,挤成直径相等的条状颗粒,再置滚圆机内滚圆,滚圆频率24 HZ,时间3 min;取出微丸40℃烘干,筛分,即得微丸,收率92.43%以上。2、质量分析评价结果表明,研制的玳玳黄酮自微乳化微丸为球形黄褐色小丸,粒径16～30目。玳玳黄酮自微乳化微丸在不同pH值的分散介质(pH=1.0盐酸溶液、pH=4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH=6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水),不同转速(50、75、100r·min-1,蒸馏水为分散介质)和不同温度(25℃、37℃、50℃,蒸馏水为分散介质)下,乳滴的粒径基本相同,没有明显差别。三批玳玳黄酮自微乳化微丸在水中成乳后的粒径为78.8～85.8nm之间,且该乳滴大小与4小时后测定的结果无明显差异。薄层色谱鉴别显示,玳玳黄酮自微乳化微丸供试品在柚皮苷、新橙皮苷对照品斑点的相应位置有相同颜色的荧光斑点,阴性对照无干扰。建立的玳玳黄酮自微乳化微丸中总黄酮紫外分光光度含量测定法表明,三批样品中总黄酮含量分别为40.84 mg· g-1,40.49 mg· g-1,40.28 mg · g1;建立的同时测定玳玳黄酮自微乳化微丸中柚皮苷、新橙皮苷含量的高效液相色谱法表明,三批样品中柚皮苷含量分别为11.68 mg ·g-1,11.31 mg ·g-1,11.28 mg ·g-1,新橙皮苷含量分别为16.82 mg · g-1,16.45 mg · g-1,16.44 mg · g-;建立的玳玳黄酮自微乳化微丸特征图谱HPLC分析共有模式,分析六批样品的相似度均大于0.900。3、玳玳黄酮自微乳化微丸在四种不同pH值溶出介质中有相同的溶出行为,且15min内的溶出量均达85%以上,达到速释的效果。玳玳黄酮自微乳化微丸溶出过程以一级动力学方程拟合最佳。柚皮苷和新橙皮苷在pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液和蒸馏水中的f2值分别为94.32,95.88,91.89和92.48,表明柚皮苷和新橙皮苷从自微乳化微丸中同步释放。4、玳玳黄酮自微乳化微丸的肠吸收和促吸收及其吸收机制考察结果表明,玳玳黄酮自微乳化微丸药效特征成分柚皮苷和新橙皮苷在不同肠段中90 min时的累积吸收量按十二指肠、空肠、回肠依次下降,十二指肠与空肠之间无显著性差异(P>0.05);玳玳黄酮自微乳化微丸质量浓度为3.6,7.2,12.0mg·mL1三个水平时,在空肠段的吸收随着时间的增加而增加,以肠囊内柚皮苷和新橙皮苷浓度的对数值lnC对取样时间t做线性回归,相关系数均大于0.9,表现出一级吸收动力学过程,吸收速率常数(Ka)均随药液浓度的增加而增加(P<0.05),表明其为被动吸收;在相同给药剂量下,玳玳黄酮自微乳化微丸药效成分在大鼠空肠90 min的累积吸收量是玳玳黄酮有效部位提取物的1.3倍,可显著改善药效成分的肠吸收。5、比较玳玳黄酮自微乳化微丸与玳玳黄酮有效部位的大鼠体内药代动力学研究结果表明,口服后的药动学参数,柚皮苷AUC0-24)分别为(17.710±6.588)微丸和(9.139±1.982)有效部位mg·h·L-1,Cmax分别为(4.816±1.329)微丸和(1.575±0.324)有效部位mg·L-1,tmax分别为(0.611 ±0.086)微丸和(0.917 ±0.204)有效部位h,t1/2分别为(13.078 ±6.382)微丸和(11.678±6.919)有效部位h,新橙皮苷AUC(0-24)分别为(18.094±4.892)微丸和(10.961±2.276)有效部位mg·h·L-1,Cmax分别为(5.657±1.391)微丸和(2.096±0.512)有效部位mg·L-1,tmax分别为(0.583±0.091)微丸和(0.806±0.222)有效部位h,t1/2分别为(14.606±7.562)微丸和(10.985 ±6.963)有效部位h。以玳玳黄酮有效部位为参比,玳玳黄酮自微乳化微丸柚皮苷和新橙皮苷的相对生物利用度分别为193.78%和165.08%,口服生物利用度明显提高,药剂学性质得到改善。结论:针对玳玳总黄酮有效部位溶解度较低问题,为提高药效成分的溶出速度及改善其口服生物利用度,基于自微乳化给药系统,设计研制具有降脂作用的玳玳黄酮自微乳化微丸。研究利用溶解度试验,三元相图的绘制、单纯网格设计等方法筛选并确定处方,通过正交试验设计优选并确定了简单稳定、重现性良好的玳玳黄酮自微乳化微丸的最佳制备工艺。通过自微乳化微丸制剂的外观性状、粒径分布、自乳化效率等特征评价说明玳玳黄酮自微乳化微丸具有良好的自微乳化效率,自微乳粒径可达78～86 nm。研究以总黄酮含量、主成分柚皮苷和新橙皮苷含量分别考察玳玳黄酮自微乳化微丸在四种不同pH值溶出介质中的溶出度,说明它们具有相同的溶出行为,相似因子(f2)分析溶出曲线说明柚皮苷和新橙皮苷从自微乳化微丸中同步释放,玳玳黄酮自微乳化微丸溶出过程以一级动力学方程拟合最佳。建立了玳玳黄酮自微乳化微丸薄层色谱鉴别法,总黄酮紫外分光光度含量测定法,同时测定玳玳黄酮自微乳化微丸中柚皮苷、新橙皮苷含量的高效液相色谱法等质量控制方法,首次建立了玳玳黄酮自微乳化微丸高效液相色谱特征图谱共有模式,为以中药有效部位为原料制备的玳玳黄酮自微乳化微丸的多指标整体质量控制体系的建立提供了可借鉴的方法。玳玳黄酮自微乳化微丸的肠吸收和促吸收及其吸收机制考察结果表现出一级吸收动力学过程,为被动吸收,吸收速率常数(Ka)均随药液浓度的增加而增加(P<0.05);在相同给药剂量下,玳玳黄酮自微乳化微丸药效成分在大鼠空肠90 min的累积吸收量是玳玳黄酮有效部位提取物的1.3倍,可显著改善药效成分的肠吸收。通过大鼠体内生物利用度和药代动力学研究证实,固体自微乳化给药系统能明显提高中药玳玳黄酮的口服生物利用度和改善其药剂学性质。研究结果为因地制宜地充分开发利用福建省丰富的中药玳玳资源,为进一步研制安全有效的玳玳降脂中药制剂,为玳玳高附加值的综合开发利用提供了科学的理论和实验依据。