背景与目的：套细胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma，MCL）是B细胞恶性肿瘤的一种,占非霍奇金淋巴瘤的5-10%；在2008年新的WHO肿瘤分类中将套细胞淋巴瘤分到成熟的B细胞恶性肿瘤。MCL的瘤细胞起源于初级滤泡或次级滤泡的未受抗原刺激的CD5+CD23-的幼稚边缘区或外周血记忆性B细胞。目前套细胞淋巴瘤的治疗模式是以化疗为主的综合治疗，虽然各种治疗方案不同程度的改善MCL患者的完全缓解率，但是仍不能延长患者的总生存期［1］，因此迫切需要新的治疗方法以提高患者的预后。TLRs（Toll like receptors，TLRs）是一类进化保守的胚系编码的模式识别受体，在识别病原微生物中发挥着重要的作用［2］，于1988年首先在果蝇体内被发现［3］，1997年在人体内发现其同系物，称为人类Toll蛋白［4］，到目前为止，共发现13种。TLRs属于Ⅰ型跨膜蛋白，有富含亮氨酸的胞外区，富含半胱氨酸的跨膜区和TOLL/IL-1R同源的胞内区。TLRs在绝大多数血液系统恶性肿瘤中均有不同程度的表达,包括B系淋巴瘤细胞和骨髓瘤细胞等[5-8]，并且有一定的生物学效应。本研究检测TLR在套细胞淋巴瘤中表达情况，以及TLR的配体对套细胞淋巴瘤的作用，其中TLR9的配体为CpG基序，CpG基序是一组从细菌DNA中提取的非甲基化的富含胞嘧啶鸟嘌呤的核苷酸序列，1995年由美国一位学者首先发现和应用［9］。CpG基序易降解，因此研究中应用人工合成的CpG DNA。CpG ODN为人工合成的以非甲基化的CpG二核苷酸为核心的六核苷酸。大量的体外实验证明，CpG ODN在抗肿瘤治疗、提高疫苗的效率、抗过敏反应等方面有着重要的作用［10］，关于CpG的作用机制，早在1996年就发现CpG基序与Toll样受体（Toll like receptors）家族TLR9结合发挥作用，通过若干信号传递途径活化转录因子，启动相关细胞因子的基因转录［11］。相关研究表明，B型CpG ODN对慢性淋巴细胞白血病患者的白血病细胞有着明显的诱导凋亡作用，其作用机制与JAK/STAT通路的激活有关［12］。基于套细胞淋巴瘤的治疗现状，TLR在血液系统恶性肿瘤的表达情况及研究现状，本文研究重点选择为检测TLR在套细胞淋巴瘤细胞系中的表达情况，以及TLR的配体对套细胞淋巴瘤细胞系的作用，为进一步探讨其机制提供线索。这也为提高套细胞淋巴瘤的治疗效果,改善疾病的生存和预后提供了新的潜在治疗靶点。方法：一、检测TLR的表达水平：1．取对数生长期的套细胞淋巴瘤细胞系提取RNA，按照试剂盒的说明进行反转录，进行PCR及实时定量PCR，检测TLR的表达情况；2．取对数生长期的套细胞淋巴瘤细胞系进行胞内染色,检测TLR9的表达；3．应用Western Blot方法检测套细胞淋巴瘤细胞系TLR9的蛋白表达；4.利用免疫组化的技术，检测套细胞淋巴瘤患者的淋巴结标本中TLR9的表达情况，正常人的淋巴结标本做为对照。二、观察B型CpG684刺激细胞系后细胞的变化，应用吉姆萨染色的方法。三、检测B型CpG对套细胞淋巴瘤细胞系的作用：取对数生长期的细胞系进行试验，B型CpG684刺激细胞系为实验组，A型CpG2216刺激细胞系做为对照，第5天检测细胞的凋亡情况。结果：1．TLR的基因表达水平：(1)RT-PCR结果显示套细胞淋巴瘤细胞系G519及Mino上的TLR1-10有不同程度的表达，其中TLR3、5、9、10表达量较高；(2)实时定量PCR结果显示套细胞淋巴瘤细胞系G519及Mino上的TLR1-10有不同程度表达，其中TLR9的表达最高，增加倍数为1.45×104±168；2．TLR9的蛋白表达水平：(1)Western blot结果：套细胞淋巴瘤细胞系G519及Mino有明显的TLR9的表达条带；(2)流式细胞术的检测结果：套细胞淋巴瘤细胞系G519及Mino有TLR9的表达；(3)免疫组化的结果：套细胞淋巴瘤患者的淋巴结石蜡切片检测到TLR9的表达较正常人明显增多。3．应用吉姆萨染色的方法观察细胞显示B型CpG684刺激后，套细胞淋巴瘤细胞发生变化。4．CpG684刺激后诱导套细胞淋巴瘤细胞G519及Mino发生凋亡：B型CpG684刺激套细胞淋巴瘤细胞系后，诱导细胞发生凋亡，且随着浓度的增加而增加；A型CpG2216刺激套细胞淋巴瘤细胞系后无明显改变。结论：1．TLR1-10在套细胞淋巴瘤细胞系中有不同程度的表达，其中TLR9较高表达，同时在套细胞淋巴瘤患者的淋巴结标本中得到验证；2. B型CpG684作用于套细胞淋巴瘤细胞系后引起细胞大小改变；3．B型CpG684刺激套细胞淋巴瘤细胞系后能够诱导套细胞淋巴瘤细胞系的凋亡。