【摘 要】
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本文从二倍体酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株出发,用McClary培养基,经25℃、7天的产孢培养,对ZJD3系列二倍体菌株进行单倍体分离,获得单倍体71株。对筛选所得单
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本文从二倍体酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株出发,用McClary培养基,经25℃、7天的产孢培养,对ZJD3系列二倍体菌株进行单倍体分离,获得单倍体71株。对筛选所得单倍体菌株进行交配型鉴定和发酵性能测定,得交配型a的菌株30株,交配型a的菌株18株。从中筛选获得发酵性能较优的单倍体菌株4株,其中a型1株,α型3株,分别为:zs-11(a,ZJD3-7)、zs-5(α,ZJD3-3)、zs-13(α,ZJD3-7)、zs-14(α,ZJD3-11),乙醇产率均比各自的亲株提高3％以上。
后运用基因工程从变异链球菌(Streptococcus mutans)中克隆编码3-磷酸甘油醛脱氢酶的gapN基因,并在质粒pUG36和pDB20基础上构建重组质粒pUG36-gapN和pDB20-gapN。敲除选育所得的高产酿酒酵母单倍体zs-11(a,ZJD3-7)菌株的URA3基因,并将上述重组质粒分别引入URA3敲除的该菌株中,验证得到阳性转化子。经对工程菌的酒精发酵测定,结果表明：引入gapN基因的工程菌株ZSD pUG36-gapN,与亲株zs-11比较,乙醇产率提高2.9％。
本研究通过传统产孢及基因工程相结合的方法,实现了构建高产乙醇酿酒酵母工业菌株的目标。同时,就gapN基因引入zs-11菌株后,对其胞内代谢流的可能影响进行了初步分析探讨。
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