致敏DC诱导CTL特异性杀伤HL60细胞的实验研究

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目的:生物治疗恶性肿瘤方法的出现,对白血病的临床预后起到了明显的改善作用。但从根本上解决白血病这一难题,有待于对不同类型白血病细胞靶向分子-癌抗原的发现和应用。树突状细胞(DC)是目前所发现功能最强大的抗原提呈细胞(APC),能有效地激发机体初次特异性免疫反应。以DC为中心的肿瘤生物治疗,是该领域研究发展的主要方向之一。本研究初步探讨了弱酸洗涤法和冻融法获得早幼粒细胞白血病细胞系HL60表面抗原多肽的条件,通过应用负载HL60细胞肿瘤抗原的DC体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对该白血病细胞系的杀伤研究,为白血病细胞抗原多肽的获得方式、有效致敏DC剂量的确定以及DC在白血病生物治疗中的应用提供一定实验依据。 方法:本实验通过用弱酸洗涤法和冻融法获得早幼粒细胞白血病细胞系HL60的抗原多肽,经透析、冻干等方法去除盐离子并浓缩后以Lowry’s法定量抗原多肽的浓度。经40.0ng/ml的HL60细胞抗原多肽冲击从外周血中用GM-CSF、IL-4和TNF-a体外7天诱生的DC,制备出负载HL60细胞抗原多肽的DC,活化自外周血中提取的T淋巴细胞,生成具有识别白血病细胞抗原的特异性CTL,进一步探讨肿瘤抗原特异性CTL对HL60细胞的体外杀伤效应。在本实验中同步进行了胃癌细胞系SGC7901的参照研究。 结果:外周血单个核细胞体外诱生DC时间为7±1天,CDla细胞表型检定纯度达78.50%,光学显微镜和电子显微镜下具有典型的树突状细胞特征。经免疫刺激活性分析,DC刺激同种T细胞的活性明显高于外周血单个核细胞。Lowry’s法准确定量出冻融法和酸洗法所获得的HL60细胞抗原多肽,分别达到116.7968μg/ml和62.9163μg/ml,进一步用抗原多肽冲击DC后,负载HL60细胞酸洗抗原多肽的DC诱导抗原特异性CTL对HL60细胞和SGC7901细胞的杀伤率分别为68.29%土n.37%和24石0%土4.40%,即捕获HL60细胞酸洗抗原多肽CTL对e60细胞的特异性杀伤作用明显高于对SGC7901细胞的非特异性杀伤作用中功刀1* 负载冻融抗原多肽的DC诱导抗原特异性CTL对HL60细胞和SGC7901细胞的杀伤率分别为45.950土8.470和16.09O土4.980,即捕获e60细胞冻融抗原多肽的CTL对HL60细胞杀伤作用明显也高于对SGC7901 细胞的杀伤作用 中<0刀1人与此同时,负载酸洗e60细胞抗原多肽的DC较负载冻融HL60细胞抗原多肽的DC体外诱导的C几对HL60细胞和SGC7901细胞具有更加显著的杀伤活性b<0*人 结论:①冻融法和弱酸洗涤法获取早幼粒细胞白血病细胞系HL60细胞抗原多肽的方法简便实用;②HL60细胞有该类型白血病特异性抗原表达,并可通过冻融法或弱酸洗涤法获取,且弱酸洗涤法所获得的抗原具有更高的兔疫刺激活性;③弱酸洗涤法提取HL60细胞抗原多肽之后,细胞生存活性明显下降,不能继续培养;④透析脱盐、冻干浓缩e60细胞抗原多肽的方法,可有效地提高抗原浓度且不影响其兔疫原性;⑤LoW、法可应用于定量冻融法和弱酸洗涤法获取的肿瘤细胞抗原蛋白多肽;③通过细胞因子的应用,在体外可有效地自外周血单个核细胞诱导出高免疫活性的 DC;@以 40nglnil终浓度的抗原多肽冲击 DC,可诱导 CTL产生明显的HL60杀伤活性;③不同组织来源的肿瘤细胞系间可能存在交叉抗原。
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