【摘 要】
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目的:采用纳米雄黄作用细粒棘球蚴原头节,测定纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节生长的影响,观察纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节光镜和电镜形态的影响,检测纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节内SOD、ROS、GSH、Caspase-3指标变化,探讨纳米雄黄抗细粒棘球蚴治疗的可能性,以期为纳米雄黄在肝细粒棘球蚴病治疗的临床应用奠定基础。方法:收集感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,用无菌方法抽取肝脏上细粒棘球蚴囊泡中囊液至无菌容器中,
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目的:采用纳米雄黄作用细粒棘球蚴原头节,测定纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节生长的影响,观察纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节光镜和电镜形态的影响,检测纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节内SOD、ROS、GSH、Caspase-3指标变化,探讨纳米雄黄抗细粒棘球蚴治疗的可能性,以期为纳米雄黄在肝细粒棘球蚴病治疗的临床应用奠定基础。方法:收集感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,用无菌方法抽取肝脏上细粒棘球蚴囊泡中囊液至无菌容器中,PBS清洗至原头节活力大于98%,将原头节加入RPMI 1640培养基体外培养3天,配制0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L浓度的纳米雄黄溶液,将其作用于细粒棘球蚴原头节。用0.1%的伊红染色,在光学显微镜下观察纳米雄黄不同时间、不同浓度对原头节的活力的影响,实验单独重复3次,根据数值绘制活力曲线。扫描电镜（SEM）观察原头节表面超微结构;透射电镜（TEM）观察原头节内部超微结构的改变;酶标仪检测纳米雄黄对原头节体内ROS的影响;采用试剂盒检测原头节体内SOD、GSH的表达变化;Caspase-3试剂盒检测不同浓度的纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节内Caspase-3酶活性;Western blot检测不同浓度的纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节p-Akt蛋白表达水平。结果:体外培养原头节3d后,control组及DMSO溶剂组细粒棘球蚴原头节的活力无明显改变,不同浓度纳米雄黄（0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用细粒棘球蚴原头节,原头节形态结构均发生改变,其中4μmol/L纳米雄黄组对细粒棘球蚴原头节破坏作用强于其他浓度组,且光镜下观察虫体萎缩,伊红染色呈红色（正常虫体为透明色）,扫描电子显微镜下观察,control组和DMSO溶剂组原头节表面超微结构完好;不同浓度的纳米雄黄作用后原头节表面超微结构有损伤,主要集中在虫体表层,但整体形态依旧完整;随着纳米雄黄浓度的增加,虫体表面出现皱缩,原头节形态改变明显,表层有虫蚀样改变;内部超微结构变化出现微绒毛减少,有少量脂滴出现,合胞体带变薄、结构松散。不同浓度纳米雄黄作用细粒棘球蚴原头节2天和4天后,ROS水平较control组和DMSO溶剂组增高,SOD和GSH活性较control组和DMSO溶剂组明显降低;而药物作用后0.5μmol/L和4μmol/L纳米雄黄组Caspase-3活性较control组和DMSO溶剂组活性增加,且4μmol/L组增加较显著。Western blot结果显示P-Akt的表达量随药物浓度及时间的增加而呈明显下降趋势。结论:1.纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节的生长有抑制作用。2.其作用机制可能是通过氧化应激途径抑制了细粒棘球蚴原头节中的p-Akt的表达,并上调Caspase-3的表达而抑制其生长、促进凋亡。
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