背景:耐辐射奇球菌（Deinococcus radiodurans,DR）是至今为止发现的一种对电离辐射、紫外线、强氧化剂和化学诱变剂等均具有超强耐受力的极端微生物。Ppr M是在研究耐辐射奇球菌ppr I和ppr A之间的关系时发现的一个新的依赖Ppr I的可能的调节蛋白,并发现ppr M基因缺失菌株对γ辐射的敏感性明显增加。Ppr M是冷激蛋白同源物,其功能尚不完全清楚。有报道称ppr M是非常重要的抗逆基因,但是关于ppr M基因启动子未见报道,其在辐射抗性中的调节或被调节方式并不清楚。ppr I基因被认为是辐射抗性机制的总开关,Ppr I蛋白是一种DNA双链结合蛋白,其功能与电离辐射抗性相关。基于Ppr M对Ppr I蛋白的依赖性,我们推测Ppr I蛋白可能通过结合ppr M的启动子或周围序列来发挥增强ppr M的抗辐射作用。目的:本研究将首先寻找ppr M的启动子,确定启动子功能,再表达和纯化Ppr I蛋白,利用凝胶阻滞实验观察Ppr I蛋白是否与预测的ppr M启动子结合。本实验通过对耐辐射奇球菌ppr M启动子的分析鉴定,以及与Ppr I蛋白相互关系的研究,为ppr M基因在耐辐射球菌抗辐射调控网络中的地位与作用的阐明提供资料。对进一步探索DR菌的极端抗性与DNA修复机制具有重要的理论意义和应用价值。方法:首先运用生物信息学方法预测ppr M的启动子;再构建含有绿色荧光蛋白报告基因的表达载体以确定其是否具有启动子的功能;构建p ET-28a-ppr I重组表达载体并纯化蛋白,然后通过凝胶阻滞实验检测Ppr I蛋白与含有生物素标记的启动子探针是否结合,以确定Ppr I蛋白与ppr M启动子或周围序列的功能关系。结果:运用生物信息学方法预测ppr M的启动子位于DR₀904至DR₀906之间。构建了含有绿色荧光蛋白报告基因、ppr M基因、ppr M启动子的三联表达载体,证明所预测序列具有启动子的功能。成功表达并纯化出Ppr I蛋白,通过EMSA方法证明Ppr I蛋白与预测的ppr M启动子序列体外实验并没有结合关系。结论:1.生物信息学预测的ppr M基因启动子序列位于DR₀907上游2Kbp的位置,核心序列在1号染色体上的具体位置是911977⁹12026。2.预测的ppr M启动子序列对ppr M基因具有启动子功能。3.Ppr I蛋白与ppr M启动子体外没有结合关系。