通过化学修饰和固定化提高溶菌酶利用效果的研究

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhut2009
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溶菌酶(Lysozyme),也称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(EC3.2.1.17),是一种能够有效水解肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酰之间的β-1,4糖苷键的葡萄糖苷酶。β-1,4糖苷键广泛存在于细菌细胞壁上,因此溶菌酶具有快速裂解细菌的细胞壁,从而杀死细菌的作用。目前,溶菌酶已在医疗卫生、食品加工等领域作为灭菌剂被广泛使用。但使用游离酶的高成本却制约了其进一步地应用。本课题通过化学修饰和固定化等手段研究提高溶菌酶的利用效果。采用724弱酸性阳离子树脂,从鸡蛋蛋清中提取及纯化出溶菌酶。采用传统的环氧氯丙烷法直接将溶菌酶固定在惰性载体Sepharose4B上,制备溶菌酶柱,通过酶柱对细菌的抑制作用间接计算其的酶活力。另外,首先通过化学修饰,将半乳糖连接上溶菌酶,利用半乳糖与蓖麻凝集素专一性结合的特性,将经化学修饰的溶菌酶偶联于带有蓖麻凝集素作为配基的惰性载体Sepharose4B上,制备出修饰溶菌酶柱,也是通过酶柱对细菌的抑制作用计算出其酶活力。对固定未修饰和经化学修饰的溶菌酶进行酶活力和重复使用效果等比较,结果显示,从142mL的鸡蛋清液中可纯化得到167.6mg溶菌酶,其酶活力为2120UI/mg,酶活力回收率为73%。直接偶联的天然酶柱中酶活力为530UI/mg,可重复使用三次,重复使用酶活力损失率分别为2次使用损失1.88%,3次使用后损失2.59%。由固定修饰溶菌酶制备得到的修饰酶柱具有比天然酶柱更高的活力,而且能重复使用3次,与天然酶柱相比,在重复使用中酶活力损失率较少,在第一次使用后与第二次使用后,酶活力损失率分别为0.09%和0.26%。说明对通过半乳糖修饰后的溶菌酶进行固定,其酶活力更高,稳定性更好,可多次使用。研究为提高利用溶菌酶的效果提供了实验数据和新的方法。
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