【摘 要】
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LEA蛋白是一个大类亲水蛋白家族,已经被证实参与提高植物对多种非生物胁迫的耐受性。LEA蛋白被分为7个不同的亚族,LEA1、LEA2、LEA3亚族为典型的LEA蛋白,在植物应对非生物胁迫的功能研究中较为广泛。而对于非典型的LEA蛋白（如LEA5亚族蛋白）的功能和作用机制的研究较少。本实验从干旱胁迫的小麦差异表达的蛋白中获得两个非典型LEA蛋白,WZY5和LEA-LIKE1,对其在非生物胁迫中的功能
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LEA蛋白是一个大类亲水蛋白家族,已经被证实参与提高植物对多种非生物胁迫的耐受性。LEA蛋白被分为7个不同的亚族,LEA1、LEA2、LEA3亚族为典型的LEA蛋白,在植物应对非生物胁迫的功能研究中较为广泛。而对于非典型的LEA蛋白（如LEA5亚族蛋白）的功能和作用机制的研究较少。本实验从干旱胁迫的小麦差异表达的蛋白中获得两个非典型LEA蛋白,WZY5和LEA-LIKE1,对其在非生物胁迫中的功能进行了研究。本实验从“郑引1号”冬小麦中克隆得到WZY5和LEA-LIKE1两个基因的c DNA序列,对两个基因进行了生物信息学分析,构建了原核表达和真核表达载体,并转化大肠杆菌和毕赤酵母,对原核表达的蛋白进行纯化,体外验证了WZY5和LEA-LIKE1与大肠杆菌非生物胁迫的耐受关系。通过以上研究,主要获得以下结论:1.从“郑引1号”冬小麦中克隆得到WZY5和LEA-LIKE1两个基因的c DNA序列,WZY5基因全长为456bp,LEA-LIKE1基因全长为411bp。亲水性和无序性预测结果显示WZY5、LEA-LIKE1蛋白为亲水性蛋白,并且都高度无序。2.成功构建了原核和真核表达载体,并转化得到大量表达WZY5、LEA-LIKE1蛋白的大肠杆菌和毕赤酵母菌株。3.通过对重组大肠杆菌在不同诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度情况优化分析,总结得出最佳诱导条件为28℃、0.2m MM IPTG、140rmp诱导8h。根据上述的诱导条件扩大培养后,利用GST·Bind?树脂对WZY5、LEA-LIKE1两个蛋白进行纯化,并获得出大量高纯度的目的蛋白。4.WZY5、LEA-LIKE1蛋白能提高重组大肠杆菌对PEG、Na Cl、高温以及低温胁迫的耐受性,WZY5保护效果较LEA-LIKE1好。
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