【摘 要】
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羊肚菌(Morchella spp)是一类营养价值极高的珍稀食药用真菌,一直以来深受广大消费者的喜爱,但是近年来多变的环境及过度的采摘导致了野生羊肚菌的资源匮乏,因此羊肚菌的人工培育已成为必然。羊肚菌发生及生长所需的环境条件十分苛刻,目前羊肚菌的栽培仍是以野外自然环境为主,开放式的栽培环境也就导致了羊肚菌病害频发。但是目前关于羊肚菌病害的研究报道并不多,现已报道的羊肚菌病害病原菌数量极少。因此,分
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羊肚菌(Morchella spp)是一类营养价值极高的珍稀食药用真菌,一直以来深受广大消费者的喜爱,但是近年来多变的环境及过度的采摘导致了野生羊肚菌的资源匮乏,因此羊肚菌的人工培育已成为必然。羊肚菌发生及生长所需的环境条件十分苛刻,目前羊肚菌的栽培仍是以野外自然环境为主,开放式的栽培环境也就导致了羊肚菌病害频发。但是目前关于羊肚菌病害的研究报道并不多,现已报道的羊肚菌病害病原菌数量极少。因此,分离并鉴定羊肚菌病害中的病原菌对整个羊肚菌产业都有着巨大的意义。本文以南充世顺农业有限公司羊肚菌栽培基地的六妹羊肚菌患病子实体为材料,进行了羊肚菌病原菌的分离与鉴定、病原菌致病性检测、病原菌生物学特性研究、病原菌致病机制及病害防治的初步探索等实验,为后期羊肚菌病害的防治研究提供一定的参考依据。本课题研究主要取得了如下结果:(1)从6株染病羊肚菌子实体中共分离纯化得到5株不同形态的真菌,编号分别为M-1、M-4、M-5、M-8和M-10。经形态学与ITS r DNA序列分析相结合鉴定出菌株M-1为紧密帚枝霉(Sarocladium strictum)、M-4为高山被孢霉(Mortierella alpina)、M-5属拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、M-8为总状毛霉(Mucor racemosus)、M-10属地丝霉属(Geomyces)。致病性的检测结果表明5株菌中高山被孢霉和拟盘多毛孢对羊肚菌有致病性,其中拟盘多毛孢的致病症状与羊肚菌自然患病的症状一致,说明拟盘多毛孢是羊肚菌病害的主要致病菌,高山被孢霉为疑似致病菌。(2)本研究从培养基、p H值、温度、碳源及氮源5个方面探索了两株病原菌的最适生长条件。研究结果显示高山被孢霉的最适生长条件为p H=5、温度30℃下的PDA或者麦芽糖为碳源、尿素为氮源的察氏培养基。拟盘多毛孢的最适生长条件为p H=7、温度25℃下的PSA或者麦芽糖作碳源、硝酸钠作氮源的察氏培养基。(3)对两株菌进行了其致病机制的初步探索,主要包括产几丁质酶和纤维素酶的鉴别、利用羊肚菌菌丝内可溶性糖的情况以及作用于羊肚菌子实体过程中羊肚菌防御酶活性的变化。结果表明,两株菌株的几丁质酶和纤维素酶活性都很低,而且也都未在平板培养基上产生肉眼可见的透明圈。两株病原菌——高山被孢霉和拟盘多毛孢都能利用羊肚菌菌丝内可溶性糖,其中拟盘多毛孢对可溶性糖的利用率明显大于高山被孢霉。两株菌都会引起羊肚菌子实体内防御酶活性的变化,随着子实体的生长,接种了高山被孢霉的羊肚菌体内SOD和POD酶活比对照酶活低,CAT酶活比对照酶活高;接种了拟盘多毛孢的羊肚菌体内3种酶的活性都比对照组高。(4)本研究所选10种植物对两株病原菌的抑菌实验结果表明,大蒜对两株菌株都具有较好的抑制作用,另外朝天椒对拟盘多毛孢有抑制作用,花椒和生姜对高山被孢霉和拟盘多毛孢都有抑制作用,综上所述,对鉴定出的病原菌高山被孢霉抑制作用较好的是大蒜和花椒,对病原菌拟盘多毛孢抑制作用较强的是朝天椒、大蒜、花椒和生姜。所选择的5种中草药中虽然青蒿对高山被孢霉的菌丝生长有一定抑制作用,但抑制效果并不好,抑制率只有29%,而5种中草药对拟盘多毛孢的菌丝生长均没有抑制作用。但是5种中草药对上述两株菌的孢子浓度抑制效果都较好,尤其是对主要致病菌——拟盘多毛孢,鱼腥草和金银花的抑制率都达到了90%,其次是蒲公英和龙葵也有80%的抑制率。
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