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1. LY294002对人甲状腺癌细胞生长的影响及机制研究目的:探讨PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮(LY294002)对人甲状腺未分化癌HTH-15细胞中磷脂酰肌醇3—激酶( PI3K) /丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞增殖、细胞凋亡的影响。方法:将对数生长期的HTH-15细胞分组培养,以DMSO处理作为0μmol/L LY294002对照组,实验组加入LY294002 ,浓度分别为5、10、15、20μmol/ L ,培养24 h后,收集蛋白标本,Western blot检测p-Akt蛋白表达(p-Akt);以DMSO处理作为0μmol/L LY294002对照组,实验组加入LY294002 ,浓度分别为6.25、12.50、25、50、100μmol/ L ,培养24 h和48 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测50μmol/L处理组细胞周期百分比。结果:HTH-15细胞中存在PI3K-Akt路径,表达p-Akt蛋白,应用LY294002处理后能明显抑制p-Akt蛋白表达;LY294002能抑制HTH-15细胞的增殖,与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HTH-15细胞增殖抑制率增大( P<0.05),并呈现出时间-效应和剂量-效应关系;经50μmol/L LY294002处理后细胞停留在G1期的百分比明显高于DMSO对照组(p<0.05);结论:甲状腺未分化癌HTH-15细胞中存在有活性的PI3K-Akt路径,表达高水平的p-Akt蛋白,LY294002可能通过抑制PI3K-Akt信号通路中p-Akt表达抑制HTH-15细胞增殖,促进细胞凋亡。2. LY294002对人甲状腺癌细胞侵袭性的影响及机制研究目的:探讨PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮(LY294002)对人甲状腺未分化癌HTH-15细胞侵袭性的影响。方法:将对数生长期的HTH-15细胞分组培养,以DMSO处理作为0μmol/L LY294002对照组,实验组加入LY294002 ,浓度分别为25、50μmol/ L,培养24 h后,收集细胞蛋白标本,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;transwell小室实验检测细胞侵袭性。结果:HTH-15细胞中存在MMP-2蛋白表达,应用LY294002抑制PI3K-Akt路径活性,能抑制HTH-15细胞MMP-2蛋白表达;与DMSO对照组相比经25和50μmol/L LY294002处理HTH-15细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数明显减少(246.75+10.21,173+10.23,92.25+5.56,p<0.05),降低了HTH-15细胞的侵袭性。结论:甲状腺未分化癌HTH-15细胞中存在有活性的PI3K-Akt通路,表达MMP-2蛋白,LY294002可能通过抑制PI3K-Akt信号通路抑制MMP-2蛋白表达,从而降低细胞侵袭力。