【摘 要】
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脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊髓灰质炎病毒引起,主要通过粪-口途径传播的急性传染病,俗称小儿麻痹症。疫苗是预防该疾病的有效手段。血清支持细胞的生长和繁殖能力是细胞培养
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脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊髓灰质炎病毒引起,主要通过粪-口途径传播的急性传染病,俗称小儿麻痹症。疫苗是预防该疾病的有效手段。血清支持细胞的生长和繁殖能力是细胞培养过程中评价血清质量最主要的指标之一,它的选择对细胞和病毒的培养具有十分重要的意义。疫苗的免疫效果与病毒含量密切相关,所以准确测定其含量是疫苗有效性的保证。目前,使用血清试剂对脊髓灰质炎病毒培养及检测结果可能存在的影响是不容忽视的。且市面上不同来源不同厂家的血清在质量上存在批间差异,增加了疫苗生产和检定的不稳定性和疫苗质量控制的难度。目的:研究血清对脊髓灰质病毒培养及脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测的影响。方法:(1)用不同血清适应Vero细胞培养后,以三种M.O.I接种脊髓灰质炎病毒并收获病毒,采用微量滴定法测定病毒收获液感染性滴度,采用ELISA法检测收获液D抗原,分析不同血清培养对脊髓灰质炎病毒培养的影响。(2)采用6种未处理血清和6种预处理血清组(免疫吸附法)进行脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测,检测了不同组血清中脊髓灰质炎病毒中和抗体效价,并使用处理血清组进行促细胞生长试验,分析不同血清对感染性滴度的影响。结果:(l)不同血清培养Vero细胞,细胞形态相似,细胞计数结果差异不显著(P>0.05),倍增时间差异不明显(P>0.05),病毒滴度差异不显著(P>0.05),D抗原检测结果,Ⅰ型、Ⅲ型进口胎牛血清优于进口新生牛血清、进口小牛血清和国产新生牛血清,差异显著(P<0.05);Ⅱ型差异不显著(P>0.05)。相同血清不同M.O.i接种脊髓灰质病毒,病毒滴度和D抗原含量无影响,只是影响病毒病变时间快慢。(2)6种未处理血清组病毒感染性滴度检测结果差异显著(P<0.01),6种处理血清组病毒感染性滴度差异不显著(P>0.05)。未处理组2号血清的中和抗体效价为1:4,6号血清的中和抗体效价为1:8,其余各组血清的中和抗体效价均<1:4。6种处理血清组的中和抗体效价均为1:2。血清促细胞生长试验显示6种处理组血清细胞生长趋势正常。结论:(1)不同血清培养细胞会影响之后培养病毒的质量和产量,提示可优化培养条件,改进增加细胞密度的可能,更有效的利用生物反应器生产SabinIPV。(2)比较6种不同血清对脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)检测结果的影响。脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测前使用免疫吸附对血清进行预处理,可降低血清中存在的中和抗体对检测的影响,为比较不同实验室数据提供可能。
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