沼泽红假单胞菌辅酶Q10高产菌的筛选及发酵工艺优化研究

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由于辅酶Q10有特殊的生理功能,在治疗癌症等各种疾病方面有很好的疗效,是人体必需物质,无毒副作用。近年来在医药、食品添加剂和保健品方面得到了广泛应用,但目前辅酶Q10的合成效率还不是很高,且成本非常高,因此,这需要我们投入大量的研究工作,以满足市场上日益增长的需求。本课题以提高光合细菌(PSB)菌体辅酶Q10的产量为目的,从自然界中筛选出辅酶Q10高产光合细细菌,并在建立快速测定辅酶Q10含量方法的基础上优化培养基、培养条件,同时研究添加底物结构类似物、代谢途径前体物质和天然活性物质等对PSB菌体辅酶Q10的产量的影响,本文的研究结果如下:1.经过富集纯化实验筛选出四株能产辅酶Q10的菌株分别为LB01,LB02,RB01,RB02,其中LB01菌株的辅酶Q10产量最高,经过一系列实验,初步鉴定其为光合自然细菌纲红螺菌目红螺菌科红假单胞菌属的沼泽红假单胞菌LB01(Phodopseudomonas palustris LB01)2.研究了不同的沼泽红假单胞菌保藏方法,综合比较各种保藏方法后,固体斜面好氧保藏法(液体石蜡封口保藏法)从保种时间、保藏成本、菌活力、对实验室仪器条件要求等多方面综合来看,是一种比较合适的光合细菌保种法。3.优化了沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)产辅酶Q10的发酵培养基成分和发酵条件,得到的最优培养基组合为:尿素0.036%,MgSO4·7H2O0.04%,NaAc 0.21%,NaHCO3 0.3%,KH2PO4 0.05%,NaCl 0.2%,酵母膏0.5%,蛋白胨0.82%,微量元素溶液10ml/L,微量元素和NaHCO3溶液过滤除菌,NaHCO3配成5%溶液按培养基6%加入,最佳发酵条件为:发酵周期64小时、先通氧发酵32h后限氧发酵32h、光照条件为10cm距离、pH6.5、接种量为8%,装液量为150ml/300ml。4.研究了不同添加物对沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)产辅酶Q10的影响,结果表明,在发酵培养的前期添加12%的胡萝卜汁和8%的番茄汁,当培养至48h添加0.073%的PHB和加0.16%的烟叶;当培养至62h添加0.042%的异戊二烯,可以大幅度提高辅酶Q10的产量,最终获得的辅酶Q10产量为26.57mg/L,比沼泽红假单胞菌LB01的原始产量16.1mg/L提高了65.03%
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