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细菌耐药性随着养殖业的发展而发展,养蛇行业也不例外。近年来,我们临床接诊蛇病例分离获得的耐药细菌表现日益增多,增加了临床防治的难度,蛇源性细菌的耐药情况鲜见资料报道。本课题以探究蛇源性细菌耐药情况,以及中药提取物对蛇源性细菌耐药基因影响为目的,开展了以下研究。从2016-2017年临床接诊的败血症蛇病例中,挑选分离获得的23株细菌,采用检测表型特征的常规方法结合现代分子生物学PCR方法,对23株细菌分别进行了鉴定。鉴定结果显示,23株细菌分别归属于7种细菌,其中肺炎克雷伯菌5株,肠道沙门氏菌2株,鲍曼不动杆菌3株,枸橼酸杆菌1株,摩氏摩根菌1株,普罗威登斯菌3株,粪肠球菌8株。采用纸片法进行体外抑菌试验,试验结果表明,5株肺炎克雷伯菌、8株粪肠球菌对庆大霉素和链霉素耐药,2株肠道沙门氏菌对红霉素和泰乐菌素耐药,3株鲍曼不动杆菌、3株普罗威登斯菌、枸橼酸杆菌以及摩氏摩根菌对青霉素和头孢拉啶耐药。根据细菌的耐药情况,分别设计氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅱ、质粒介导的喹诺酮类耐药基因A型qnrA、二氢叶酸合成酶基因1型SUL1、甲基化酶基因B型erm(B)、广谱β-内酰胺酶基因三个亚型:CTX-M-type、CTX-M-1 以及 blaOXA-23-like、新德里金属-β-内酰胺酶-4基因NDM4等8种耐药基因的引物,运用PCR方法检测相应的耐药基因。研究发现,5株肺炎克雷伯菌中有3株检测出aac(3)-Ⅱ耐氨基糖苷类药物的目的基因,8株粪肠球菌中有2株检测出erm(B)耐大环内酯类药物的目的基因,2株肠道沙门氏菌中有1株检测出SUL1耐磺胺类药物的目的基因,其余细菌均未能检测到耐药基因。将5种中药提取物,硫酸黄连素、双花连翘提取物、黄芩苷、天蚕素、苦参提取物分别与检测到耐药基因的细菌共培养4h和24h,检测发现,3株肺炎克雷伯菌aac(3)-Ⅱ耐氨基糖苷类药物目的基因均未能检出,2株粪肠球菌erm(B)耐大环内酯类药物的目的基因均未能检出,而1株肠道沙门氏菌与中药提取物共培养结果无变化,其SUL1耐磺胺类药物的目的基因仍然可以检测出来。综合上述研究结果可以得出以下结论:(1)23株蛇源性细菌分属于7种不同的细菌。(2)7种23株细菌的耐药情况不同。有3株肺炎克雷伯菌检测出aac(3)-Ⅱ目的基因,2株粪肠球菌检测出erm(B)目的基因,1株肠道沙门氏菌检测出SUL1目的基因,其余细菌未能检测到耐药基因。(3)硫酸黄连素、双花连翘提取物、黄芩苷、天蚕素、苦参提取物对肺炎克雷伯菌aac(3)-Ⅱ耐药基因以及粪肠球菌erm(B)耐药基因在24h内有抑制作用。