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缢蛏(Sinonovacula constricta)养殖周期短,生长快,是我国主要的经济养殖贝类之一。目前,缢蛏良种选育工作主要采用传统的群体和家系选育技术,而生长相关基因的研究可以为进一步加快选育进程提供一定的理论参考。类胰岛素生长因子(IGF)信号通路,参与调控机体的发育,生长,繁殖以及寿命等生理过程。本研究通过分子生物学技术完善了缢蛏IGF系统的基因组成和表达特征,并通过添加外源胰岛素探索IGF系统对缢蛏稚贝生长的作用;利用IGF受体抑制剂探究了IGF系统对缢蛏稚贝生长的影响以及对幼虫存活率和变态率的影响。研究结果如下:1.首次鉴定了缢蛏IGF系统中的两个IGFALS基因,分别命名为IGFALSa和IGFALSb。IGFALSa基因的c DNA序列为4809bp,ORF长度为2991bp,编码996个氨基酸;IGFALSb基因的c DNA序列为1925bp,ORF长度为1641bp,编码546个氨基酸。两个IGFALS基因都具有信号肽,不属于跨膜蛋白,且都具有丰富的亮氨酸富集基序。通过荧光定量技术分析了IGFALSa和IGFALSb在缢蛏不同发育时期和不同组织中的表达模式,结果表明两个基因的表达量都会随着幼虫的发育而增加,IGFALSa在匍匐幼虫期的表达量最高,而IGFALSb则在双水管时期表达量最高。两个IGFALS基因在各个组织广泛表达,其中IGFALSa在外套膜和性腺组织中高表达,在肝胰腺和血淋巴等组织中的表达量相对较低,而IGFALSb主要在水管中表达,在外套膜、性腺以及斧足这几个组织中也有少量表达,在肝胰腺,鳃和血淋巴这几个组织中只有痕量表达。2.利用不同浓度胰岛素刺激缢蛏稚贝,发现当胰岛素浓度为0mg/L-10mg/L时,IGFALSa,IGFALSb及其下游基因IRS的表达量随着胰岛素浓度的增加而上升,并在10mg/L时表达量达到最高,而当胰岛素浓度达到20mg/L时,三个基因的表达量都开始下降。此外,分析了IGF系统对MAPK通路和PI3K通路的影响,当胰岛素浓度达到10mg/L时,MPKP1和PDK1的表达量也有显著的上升,PDK1则随着浓度变化有一定的波动。3.利用10mg/L胰岛素刺激缢蛏稚贝,探究胰岛素不同作用时间对IGF通路相关基因表达模式的影响。结果表明IGFALSa和IGFALSb的表达模式相似,随着时间的增加表达量上升,在8h表达量最高。而对于两个IGFALS基因的下游基因IRS,表达量则一直随着刺激时间的增加而上升,在72h达到最高。利用10mg/L胰岛素长期投喂缢蛏稚贝,表明胰岛素喂养组的稚贝日生长率高于对照组。各组壳长的平均日生长率分别为:胰岛素组4%,空白组3.28%,Tris-HCL组3.11%。各组壳宽的平均日生长率分别为:胰岛素组1.73%,空白组1.34%,Tris-HCL组1.33%。4.利用IGF系统中的受体抑制剂刺激缢蛏稚贝,进一步研究IGF系统对于生长的影响。利用抑制剂长期刺激稚贝,各组存活率分别为88.42%(空白组),88.5%(DMSO组)和70.60%(抑制剂组)。此外,抑制剂组的稚贝日生长率显著低于对照组,壳长的日生长率分别为3.28%(空白组),3.30%(DMSO组)和1.55%(抑制剂组),壳宽的日生长率分别为1.34%(空白组),1.41%(DMSO组)和0.76%(抑制剂组)。5.利用不同浓度的抑制剂刺激缢蛏幼虫的变态发育,结果表明抑制剂显著降低幼虫的变态率。在担轮幼虫-D型幼虫以及D型幼虫-壳顶幼虫这两个时期,随着抑制剂浓度的增加,幼虫变态率逐渐降低,并在抑制剂浓度为1mg/L时变态率最低;在壳顶幼虫-匍匐幼虫时期,0.1mg/L以及0.5mg/L的抑制剂浓度对于幼虫变态率的影响没有显著性差异,而在1mg/L浓度时,变态率显著降低。